靶向HCV IRES和NS3蛋白抑制剂筛选及评价小鼠模型的建立

论文摘要

丙型病毒性肝炎是一种严重危害人类健康的常见病和多发病。全球大约有1.7亿的人口感染丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）。我国HCV感染者已达6000万。HCV急性感染后50-80％转变为慢性感染，其中的10-20％发展成肝硬化，并与肝细胞癌的发生密切相关。迄今α-干扰素和病毒唑联合治疗是唯一的治疗方法，但这种治疗方法只对不到50％的患者显效，且具有费用高、易复发和副作用多等缺陷；尤其是我国流行的HCV 1b型，对α干扰素的治疗应答最低，因此，加强对HCV防治的研究至关重要。 HCV为单股正链RNA病毒，属黄病毒科，全长约9600个核苷酸，ORF区编码3010个氨基酸的多聚蛋白前体，经过宿主和病毒本身基因编码的蛋白酶裂解为十个功能性片段，包括4个结构蛋白（核心蛋白C、包膜蛋白E1、E2以及P7）及6个非结构蛋白（NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B）。HCV RNA 5’端没有帽子结构，由5’非编码区（NCR）内的内部核糖体进入位点（IRES）介导启动并控制着整个HCV基因组的翻译过程，而HCV NS3蛋白具有丝氨酸蛋白酶和解旋酶活性，参与病毒蛋白翻译后加工，为病毒复制所必须。因此IRES及HCV NS3／4A丝氨酸蛋白酶是目前抗病毒治疗研究的主要靶位。 多年来针对HCV NS3／4A及HCV IRES抑制剂的研究取得可喜的进展，但由于缺乏理想的小动物模型，这些药物在体内抗HCV的作用效果，以及对其毒性、安全性等难以作出评估，极大地延缓了这些药物进入临床，因而建立适用于HCV IRES和NS3蛋白抑制剂筛选及评价小鼠模型迫在眉睫。

论文目录

• 缩略语索引
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 水动力转染高效表达技术平台的建立
• 第一节 高效表达载体的构建与筛选
• 材料
• 方法
• 结果
• 小结
• 第二节 肝脏特异性高效表达载体与噬菌体整合酶的联合应用
• 材料
• 方法
• 结果
• 小结
• 第二部分 靶向HCV IRES和NS3蛋白抑制剂筛选及评价小鼠模型的建立技术路线
• 第一节 标志HCV NS3／4A丝氨酸蛋白酶活性的指示系统的建立
• 材料
• 方法
• 结果
• 小结
• 第二节 利用细胞内稳定表达的NS3蛋白验证指示系统
• 材料
• 方法
• 结果
• 小结
• 第三节 用感染HCV的huh-7细胞验证指示系统
• 材料
• 方法
• 结果
• 小结
• 第四节 靶向HCV IRES和NS3蛋白抑制剂筛选及评价小鼠模型的建立
• 材料
• 方法
• 结果
• 小结
• 讨论
• 参考文献
• 总结
• 致谢
• 个人简历
• 文献综述