论文摘要
创伤后常发生免疫抑制,易继发感染、脓毒症,甚至多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome,MODS）,最终影响结局。针对损伤、感染天然免疫很快启动非特异的细胞、体液反应,成为机体的第一道防线,其在创伤后炎症反应的发生、发展动态过程中具有重要作用。巨噬细胞是参与天然免疫的重要细胞,Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）家族中的两个重要受体TLR2、TLR4主要表达于巨噬细胞。近来发现TLR4不仅是LPS的模式识别受体（pattern recognition receptors, PRRs）,还能识别众多内源性损伤相关分子模式（damage-associated molecular patterns,DAMPs）,作为感知组织损伤的“哨兵”而介导无菌性炎症反应。TLR2能识别较TLR4更多的病原体,也参与了组织损伤后炎症反应。TLR2/4与各自的配体结合后,通过相似信号转导最终导致NF-κB活化,产生炎症细胞因子、趋化因子、共刺激分子等,并被认为在机体防御损伤、感染的天然免疫中具有开关作用。在发生天然免疫改变的同时机体发生了神经内分泌反应,表现为交感神经系统兴奋并伴以不同程度的下丘脑-垂体-肾上腺轴活化,产生肾上腺素（epinephrine,E）、去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）、糖皮质激素等,除了能调节机体一般功能外,由于神经-内分泌-免疫网络的存在,它们常影响免疫功能,以维持稳态。以往研究显示,创伤后腹腔、脾巨噬细胞对LPS的反应性降低,但其机理不清。TLR2/4是TLR家族两种主要的受体,其表达水平与对配体的敏感性密切相关。尽管对其信号转导进行了大量研究,但是对其表达的调节还不清楚。研究TLR2/4在创伤后表达变化及神经内分泌激素的调节,对于揭示创伤后免疫功能失常的机制并预防、治疗相关并发症以提高临床救治率均具有重要意义。基于以上认识,本研究采用大鼠创伤模型,以腹腔巨噬细胞为研究对象,进行了以下研究:采用RT-PCR动态观察了创伤后巨噬细胞TLR2/4 mRNA表达变化;以不同浓度Pam3CSK4、LPS刺激创伤后24小时的巨噬细胞,测定产生TNF-α水平以反映受体反应性;采用HPLC测定了创伤后24小时不同时间点血清E和NE水平的变化,同时,采用放射免疫法测定了血清ACTH、皮质醇、T3、T4、TSH、β-EP、PRL,观察了神经内分泌激素变化规律;进一步进行离体实验,以不同浓度皮质酮（corticosterone,CORT）、E、NE刺激巨噬细胞不同时间后,以实时定量PCR和半定量RT-PCR方法研究了TLR2/4 mRNA表达;最后,于创伤前行颈交感神经干离断术（TCST）以观察其对创伤后神经内分泌激素的可能调节作用。通过研究,得出以下结果:1.大鼠创伤后巨噬细胞TLR2/4 mRNA表达在伤后2小时后即降低,直至创伤后24小时。创伤后巨噬细胞对Pam3CSK4、LPS刺激后的反应性降低。2.大鼠创伤后2小时血E、NE水平即明显升高,ACTH、GC也明显升高,直至创伤后24小时。垂体-甲状腺轴变化表现为创伤后T3、T4均降低,但是TSH变化不显著。非垂体-肾上腺轴激素β-EP也于创伤后2小时即升高,PRL于创伤后24小时升高。3.CORT刺激巨噬细胞后能下调TLR2 mRNA表达,其作用具有时间、剂量依赖性,但是对TLR4 mRNA表达的影响不明显。E刺激巨噬细胞后能下调TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达,其作用也具有时间、剂量依赖性。不同浓度NE（0～10000ng/ml）刺激巨噬细胞不同时间（0～48小时）后不能明显下调TLR2/4 mRNA的表达。4.TCST不能减轻创伤后2小时明显神经内分泌激素变化,能降低24小时的血清NE、皮质醇水平。总之,本研究得出以下结论:1.大鼠创伤后巨噬细胞TLR2/4 mRNA表达降低,这对于防止创伤后机体过度炎症反应可能具有一定意义,但与此同时,也意味着机体对病原体（如G+、G-菌）处理能力降低。创伤后巨噬细胞反应性降低,可能与TLR2/4表达降低有关。2.大鼠创伤后发生明显神经内分泌反应,交感神经系统、HPA轴活化,并伴以垂体-甲状腺轴、非垂体-肾上腺轴激素明显变化,共同调节机体以维持稳态。3.较高水平CORT、E刺激巨噬细胞较长时间后能下调TLR2 mRNA或TLR4 mRNA表达。4.TCST能一定程度减轻创伤后神经内分泌激素变化,可能有一定意义。通过研究,为创伤后TLR2/4表达变化及其调节提供了一定的实验及理论依据。
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