论文摘要
本论文研究了蛙皮素BN和RGD多肽的放射性标记物在肿瘤受体显像中的应用，考察了不同协同配体和双功能螯合剂对放射性标记物的化学性质、药代动力学和生物特性的影响。首先，已经报道的放射性核素标记的蛙皮素BN多用于前列腺癌的诊断和治疗，而Cassano等的研究表明HT29结肠癌肿瘤细胞也过度表达GRP受体，为了开发此靶点的受体显像剂，我们尝试以99mTc标记连有双功能螯合剂HYNIC的蛙皮素类似物BN（7-14）NH2片段（HYNIC-β-Ala-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2）用于结肠癌的诊断显像。在其99mTc标记方法中，分别以TPPTS（三苯基膦三间磺酸钠盐）、IsoNIC（异烟酸）和PDA（2，5-二羧酸吡啶）作为协同配体得到三种三重配体标记物[99mTc（HYNIC-BN）（Tricine）（TPPTS）]、[99mTc（HYNIC-BN）（Tricine）（IsoNIC）]和[99mTc（HYNIC-BN）（Tricine）（PDA）]。研究发现，三种标记物都能获得高标记率，且都有良好的体外稳定性；通过荷HT29结肠癌裸鼠体内分布和代谢实验发现，亲水性最好的标记物[99mTc（HYNIC-BN）（Tricine）（TPPTS）]具有最佳的体内代谢分布特征，表现在其胃肠道放射性浓聚少，肾清除快，能显著地降低腹腔正常组织的放射性本底。选其用于荷瘤鼠的γ显像，我们得到了肿瘤定位显影非常清晰的γ显像图。以上实验数据表明，不同的协同配体能对HYNIC-BN的99mTc标记物的生物性质产生了显著性的影响。而γ显像结果则证明，99mTc标记的BN多肽示踪剂可应用于结肠癌显像，其中[99mTc（HYNIC-BN）（Tricine）（TPPTS）]将是一种候选的有潜力的结肠癌受体显像剂。其次，我们用177Lu标记三种不同双功能螯合剂偶联的RGD多肽E[c（RGDfK）]2，并对其体内外性质进行评价。三种标记物177Lu-DTPA-Bz-E[c（RGDFK）]2、177Lu-DOTA-E[c（RGDFK）]2和177Lu-DOTA-Bz-E[c（RGDFK）]2均可获得满意的标记率和放化纯，且在生理盐水和胎牛血清（FBS）体系中均有良好的稳定性。三种标记物的脂水分配系数LogPo/w没有显著性差异，这与它们的HPLC保留时间相一致。三种化合物DTPA-Bz-E[c（RGDFK）]2、DOTA-E[c（RGDFK）]2和DOTA-Bz-E[c（RGDFK）]2与U87MG细胞表达的整合素αvβ3结合的IC50值分别为3.23±0.78 nM、2.35±0.75nM和5.88±0.35nM，表明它们与整合素αvβ3结合能力没有显著性差异。三种标记物因为双功能螯合剂不同而有不同的177Lu螯合结构、带有不同的分子电荷和不同的供电原子，但它们在荷U87MG神经胶质瘤裸鼠体内的生物分布和体内代谢特征很类似。选取177Lu-DOTA-Bz-E[c（RGDFK）]2进行荷瘤裸鼠的γ显像，得到了令人满意的显像效果。实验证明环状E[c（RGDfK）]2二聚体结构是其177Lu标记物生物性质的决定性因素，而本实验中的三种双功能螯合剂没有引起标记物生物活性的显著性差异，本研究为进一步研制靶向整合素αvβ3的肿瘤治疗剂奠定了基础。
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目录摘要ABSTRACT第一章 绪论一. 多肽受体显像剂在肿瘤诊断中的应用1-1.1 肿瘤受体显像1-1.2 多肽放射性药物的设计1-1.2.1 靶向生物分子的选择1-1.2.2 用于多肽标记的放射性核素1-1.2.3 双功能螯合剂的选择1-1.3 用于显像的仪器二. 蛙皮素及其类似物的研究现状1-2.1 蛙皮素及其类似物的生物功能1-2.2 蛙皮素类似物的研究状况1-2.3 蛙皮素类似物的放射性标记三. RGD多肽的研究背景和发展现状1-3.1 整合素和RGD简介1-3.1.1 整合素（integrin）vB3与肿瘤新生血管靶向治疗'>1-3.1.2 整合素avB3与肿瘤新生血管靶向治疗vB3拮抗剂'>1-3.1.3 整合素avB3拮抗剂1-3.1.4 RGD的介绍1-3.2 RGD多肽放射性药物的研究进展1-3.2.1 线型RGD多肽和环形RGD多肽单体1-3.2.2 药代动力学修饰1-3.2.3 RGD多肽多聚化四. 本论文的选题和研究思路99mTc标记蛙皮素BN类似物的研究'>第二章99mTc标记蛙皮素BN类似物的研究99mTC-（HYNIC-BN）（Tricine）（L）]（L=TPPTS,IsoNIC,PDA）的制备及体外稳定性评价'>一、 [99mTC-（HYNIC-BN）（Tricine）（L）]（L=TPPTS,IsoNIC,PDA）的制备及体外稳定性评价2-1.1 实验材料2-1.1.1 实验仪器2-1.1.2 实验试剂2-1.2 实验方法(99mTc-（HYNIC-BN）（Tricine）2]的制备'>2-1.2.1 [(99mTc-（HYNIC-BN）（Tricine）2]的制备99mTC-（HYNIC-BN）（Tricine）（L）]（L=TPPTS,IsoNIC,PDA）的制备'>2-1.2.2 [99mTC-（HYNIC-BN）（Tricine）（L）]（L=TPPTS,IsoNIC,PDA）的制备2-1.2.3 质控方法o/w的测定'>2-1.2.4 脂水分配系数LogPo/w的测定2-1.2.5 三种标记物的体外稳定性评价2-1.3 实验结果2-1.3.1 ITLC法2-1.3.2 HPLC法2-1.3.3 脂水分配系数测定2-1.3.4 体外稳定性99mTC-（HYNIC-BN）（Tricine）（L）]（L=TPPTS,IsoNIC,PDA）在荷HT29结肠癌肿瘤裸鼠体内的生物评价比较'>二、 [99mTC-（HYNIC-BN）（Tricine）（L）]（L=TPPTS,IsoNIC,PDA）在荷HT29结肠癌肿瘤裸鼠体内的生物评价比较2.2.1 实验材料2-2.1.1 实验仪器2-2.1.2 实验试剂2-2.1.3 实验动物2.2.2 实验方法2-2.2.1 标准样的制备2-2.2.2 HT29细胞培养及动物模型的建立2-2.2.3 荷HT29结肠癌肿瘤裸鼠生物分布2-2.2.4 荷HT29结肠癌肿瘤裸鼠γ显像2-2.2.5 正常昆明小鼠体内代谢2-2.2.6 数据分析2-2.3 实验结果2-2.3.1 生物分布2-2.3.2 γ显像2-2.3.3 体内代谢特征三、 讨论177Lu标记的RGD dimer的研究'>第三章177Lu标记的RGD dimer的研究177Lu标记的RGD dimer放射性药物的制备和体外稳定性的研究'>一、177Lu标记的RGD dimer放射性药物的制备和体外稳定性的研究3-1.1 实验材料3-1.1.1 实验仪器3-1.1.2 实验试剂3-1.2 实验方法177Lu-DOTA-Su016],[177Lu-DOTA-Bz-Su016]和[177Lu-DTPA-Bz-Su016]的制备'>3-1.2.1 [177Lu-DOTA-Su016],[177Lu-DOTA-Bz-Su016]和[177Lu-DTPA-Bz-Su016]的制备3-1.2.2 质控方法3-1.2.3 标记物的体外稳o/w测定'>3-1.2.4 脂水分配系数LogPo/w测定3-1.3 实验结果177Lu-DOTA-SU016、177Lu-DOTA-Bz-SU016和177Lu-DTPA-Bz-SU016的制备'>3-1.3.1177Lu-DOTA-SU016、177Lu-DOTA-Bz-SU016和177Lu-DTPA-Bz-SU016的制备3-1.3.2 质控方法3-1.3.3 脂水分配系数测定3-1.3.4 标记物的体外稳定性177Lu标记的RGD dimer与U87MG细胞表达的整合素avβ3的特异性结合'>二、177Lu标记的RGD dimer与U87MG细胞表达的整合素avβ3的特异性结合3-2.1 实验材料:125I-c（RGDyK）的制备'>3-2.2125I-c（RGDyK）的制备125I标记c（RGDyK）:'>3-2.2.1 使用Idogen法125I标记c（RGDyK）:3-2.2.2 PD-10柱纯化3-2.2.3 放射化学纯度分析3-2.2.4 标记物的放射化学比活度计算3-2.3 实验方法3-2.4 实验结果177Lu标记的RGD dimer在荷U87MG肿瘤裸鼠的生物评价'>三、177Lu标记的RGD dimer在荷U87MG肿瘤裸鼠的生物评价3-3.1 实验材料3-3.1.1 实验仪器3-3.1.2 实验试剂3-3.1.3 实验动物3-3.2 实验方法3-3.2.1 U87MG肿瘤模型鼠的建立3-3.2.2 动物实验剂量准备3-3.2.3 标准样的制备3-3.2.4 荷U87MG肿瘤裸鼠生物分布3-3.2.5 荷U87MG肿瘤裸鼠阻断实验（Blocking）3-3.2.6 荷U87MG肿瘤裸鼠γ显像3-3.2.7 体内代谢性质3-3.2.8 数据分析3-3.3 实验结果3-3.3.1 生物分布3-3.3.2 阻断实验3-3.3.3 γ显像3-3.3.4 体内代谢特征四、 讨论结论与展望参考文献硕士在读期间发表的文章致谢
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