论文摘要
第一部分siRNA-MDR1真核表达载体的构建目的：构建siRNA-MDR1真核表达载体,为舌癌的耐药逆转提供方法。方法：根据MDR1的基因序列,设计并构建靶向MDR1基因的shRNA真核表达载体质粒,采用酶切电泳,质粒序列检测等方法检测重组质粒合成情况。将质粒转化DH5a感受态大肠杆菌,扩增后重新提取质粒备用。结果：采用pGenesill.1载体构建的靶向MDR1的shRNA表达载体质粒,成功转化DH5α宿主菌。经测序鉴定,表明序列完全一致。成功构建靶向MDR1基因的shRNA表达载体质粒。结论：我们成功构建pGenesill.1-siRNA-MDR1真核载体,为后续实验奠定基础。第二部分人舌癌多药耐药细胞株TCA8113/CDDP的诱导建立目的：针对目前头颈部肿瘤在化疗中产生的耐药性问题,建立人舌癌耐药细胞株TCA8113／CDDP并研究其生物学特性,为舌癌的临床治疗提供实验依据。方法：以舌癌细胞株TCA8113为诱导对象,顺铂为诱导药物,采用大剂量冲击和逐渐增加剂量相结合的方法建立了在1μg/ml顺铂作用下生长良好的耐药细胞株TCA8113/CDDP; MTT法检测（?）TCA8113/CDDP细胞及亲代细胞对不同化疗药物敏感性,细胞计数法绘制细胞生长曲线。结果：耐药细胞株TCA8113/CDDP细胞性状稳定,与亲本细胞TCA8113相比生物学特性有明显差异。MTT药物敏感性检测结果表明TCA8113/CDDP细胞对CDDP、PYM、CTX和5-FU有不同程度的耐受性,其耐药指数分别为4.27、3.03、1.41和1.09。细胞计数法显示TCA8113和TCA8113/CDDP细胞的倍增时间分别为30.1和35.2小时。结论：经顺铂诱导建立的人舌癌多药耐药细胞株TCA8113/CDDP,是可靠的人舌癌多药耐药细胞模型,可用于舌癌多药耐药机制的研究。第三部分MDR1基因在人舌癌多药耐药细胞TCA8113/CDDP中的表达及临床意义目的：探讨MDRl基因在人舌癌多药耐药细胞株TCA8113/CDDP中的表达及临床意义,为研究肿瘤的多药耐药性及其逆转剂提供理论依据。方法：RT-PCR检测TCA8113/CDDP和亲本细胞中内MDR1 mRNA的表达,免疫组化法检测其P-gp表达情况。结果：RT-PCR结果显示MDR1基因在TCA8113细胞不表达,而在TCA8113/CDDP细胞耐药细胞呈高表达。免疫组化结果显示P-gp在TCA8113/CDDP中阳性表达而在TCA8113中未表达。结论：由顺铂诱导筛选的舌癌TCA8113/CDDP细胞株产生的多药耐药性与MDR1／P-gp表达密切相关。本研究为采用MDR1逆转剂提高舌癌化疗敏感性提供了理论依据。
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