发夹式siRNA活化结直肠癌高甲基化抑癌基因的实验研究

论文摘要

CpG 岛（CpG islands）高甲基化所致抑癌基因表观遗传学沉默（epigenetic silencing）是肿瘤发生学的重要机制之一,已成为肿瘤表观遗传学组（cancer epigenomics）和人类表观基因组计划（Human Epigenetic Projects, HEP）的重要研究内容。所谓表观遗传学是指基于非基因序列改变所致基因表达水平变化,如DNA 甲基化、染色体转位等。在表观遗传学的研究中, DNA 甲基化一方面与人类发育进程密切相关,在人类发育过程中起着重要的基因表达调节作用,另一方面,它与肿瘤疾病的发生发展也有着极为重要的密切关系。结直肠癌是人类常见肿瘤疾病。抑癌基因CpG 岛高甲基化是结直肠癌发生学重要机制之一,它不仅与结直肠癌发生发展直接相关,还与基因突变/染色体不稳定和微卫星不稳定的进行性演变直接相关。在结直肠癌肿瘤发生学中,CpG 岛甲基化异常机制累及的抑癌基因很多,如DNA 修复（MLH1、MGMT）和细胞周期调控（p16、p53）基因等。由于抑癌基因的CpG 岛高甲基化现象是可以逆转的表观遗传学修饰过程,并且该逆转（CpG 岛去甲基化）可直接恢复抑癌基因的功能,此外,结直肠癌肿瘤细胞hDNMT1（human DNA methyltransferase 1）的过度表达又是导致抑癌基因CpG 岛高甲基化的关键因素,因此,特异性抑制hDNMT1 的活性有可能使高甲基化转录失活的抑癌基因恢复基因表达和生物学功能,从而使结直肠癌肿瘤细胞向正常细胞转变。RNA 干扰（RNAi）是由dsRNA 介导的转录后基因沉默机制,当外源导入的dsRNA被Dicer 酶切割成19-23nt 的小分子干扰RNAs（siRNA）后,与体内其他成分聚合形成RNA 诱导型基因沉默复合体（RISC）,然后活化的RISC 可导致与siRNA 互补靶序列的降解,从而导致特异的基因沉默效应。RNAi 技术在基因敲除或诱导基因沉默等方面都取得了可喜成果,这些为本课题选择RNAi 机制来抑制hDNMT1 的表达提供了理论依据。本研究首先设计靶向hDNMT1 mRNA不同位置的hsiRNA913和hsiRNA1620 两条发夹式siRNA,并以此为模板,通过PCR 扩增方式在体外制备可特异性诱导hDNMT1

论文目录

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• 论文正文 发夹式si RNA 活化结直肠癌高甲基化抑癌基因的实验研究
• 前言
• 材料和方法
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 全文结论
• 致谢
• 照片
• 参考文献
• 文献综述一 RNA 干扰的研究进展及其应用
• 参考文献
• 文献综述二 DNA 甲基化与抑癌基因沉默
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的论文