鬼针草总黄酮对免疫性肝纤维化大鼠治疗作用及部分机制研究

论文摘要

肝纤维化是以星状细胞（HSC）激活,细胞外基质（ECM）的合成大于降解导致肝内ECM过度沉积为特征的病理过程,是肝硬化的早期和必经阶段。导致肝纤维化的因素有很多,如病毒、药物、乙醇、缺氧、免疫因素等,都可损伤肝脏,造成炎症、细胞坏死、凋亡,进而发展成肝纤维化。现在研究认为,肝纤维病理过程是可逆的,因此寻找合适药物抑制和治疗肝纤维化具有重要意义。鬼针草,菊科,鬼针草属,一年生草本植物。其药材资源非常丰富,广泛分布在我国大多数地区。鬼针草药用历史悠久,味苦、性平而无毒,具有清热解毒,散瘀消肿等功效,民间用于治疗痢疾、腹泻、肝炎、胃痛等疾病,文献显示鬼针草的醇提物有抗炎、清除自由基和免疫调节等作用。鬼针草活性成分很多,包括黄酮苷、皂苷、生物碱、挥发油等,经我院天然药物化学教研室研究确定,从鬼针草叶中提取的鬼针草总黄酮（total flavones of Bidens bipinnataL,TFB）为其有效部位。我们前期实验发现,TFB对CCl4诱导的小鼠肝损伤和大鼠化学性肝纤维化均有显著的治疗作用,但对大鼠免疫性肝纤维化是否有作用尚不清楚。为进一步探讨TFB的药理作用,本文在查阅大量文献和前期研究基础上,采用猪血清诱导的大鼠免疫性肝纤维化模型方法,研究TFB对免疫性肝纤维化的治疗作用和部分机制。1.TFB对免疫性肝纤维化大鼠的治疗作用48只大鼠,随机分为正常组、模型组、TFB 160 mg/kg、TFB 80 mg/kg、TFB 40mg/kg等6组,每组8只。除正常组外,其余各组采用腹腔注射猪血清（0.5 ml/只,每周2次）诱导免疫性肝纤维化模型,共12周,病理组织学检查造模情况。检验造模成功后,给药组分别灌服相应的受试药物,正常组和模型组灌服等容量的生理盐水,疗程10周。处死大鼠,常规方法取血、肝脏、脾脏等组织备检。研究发现,与模型组相比,TFB能增加大鼠体重,抑制肝纤维化大鼠肝、脾指数上升;能降低血清中升高的ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CⅣ和肝组织中Hyp含量;病理组织学结果显示TFB组肝脏组织结构明显改善,肝纤维化增生程度减轻。提示TFB对猪血清所致大鼠免疫性肝纤维化有明显的治疗。2.TFB对免疫性肝纤维化治疗作用的部分机制研究与模型组比较,TFB能显著降低肝组织中MDA含量,升高肝组织中SOD和GSH-Px活性;免疫组织化学法显示,TFB组显著抑制肝组织中α-SMA、TGF-β1蛋白表达;RT-PCR显示TFB组抑制TGF-β1/Smads通路中TGF-β1,smads2 mRNA表达,升高smads7 mRNA表达;TUNEL和α-SMA双染检验细胞凋亡,显示TFB显著减少活化的HSC数目,可检测到其凋亡。提示TFB治疗实验性肝纤维化的作用可能与其抗脂质过氧化损伤和抑制TGF-β1/Smads通路减少体内HSC活化及诱导体内活化的HSC凋亡有关。结论:以上实验结果表明,TFB对猪血清诱导的大鼠肝纤维化具有明显的治疗作用,其作用机制可能与抗氧化、抑制TGF-β1/Smads信号通路及诱导体内活化的HSC凋亡有关。

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前言

第一部分鬼针草总黄酮对免疫性肝纤维化大鼠治疗作用

1.实验材料

2.实验方法

3.数据处理

4.实验结果

5.讨论

6.小结

第二部分鬼针草总黄酮对免疫性肝纤维化治疗作用的部分机制