AG490联合顺铂对人宫颈癌HCE1细胞增殖、凋亡及野生型P53蛋白表达的影响

论文摘要

目的:研究酪氨酸激酶抑制剂AG490联合顺铂对人宫颈癌细胞株HCE1细胞增殖和凋亡的作用,并观察AG490对HCE1细胞中p53蛋白表达的影响。方法:(1)培养宫颈鳞癌细胞株HCE1,观察活细胞生长情况并摄片。(2)实验分组及检测:①终浓度为20 umol/L、40umol/L、80umol/L的酪氨酸激酶抑制剂AG490培养HCE1细胞;②终浓度为20ug/mL、40ug/mL、80ug/mL顺铂培养HCE1细胞;③AG490联合顺铂培养HCE1细胞,通过MTT比色法检测培养24小时、48小时、72小时后细胞增殖活力,并计算细胞生长抑制率;流式细胞仪分别检测24小时、48小时、72小时三个不同时间点的细胞凋亡发生率,并分析细胞周期改变。(3)P53蛋白表达:分别采用终浓度为20 umol/L、40umol/L、80umol/L的酪氨酸激酶抑制剂AG490处理HCE1细胞48小时后,免疫组化检测P53表达。各实验中对照组除加入同等浓度的DMSO外,均不加任何干扰因素,统计学方法分析各实验组与对照组之间有无显著性差异。结果:(1)JAK激酶抑制剂AG490处理后凋亡细胞明显增多,细胞缩小变圆,细胞膜出泡等。(2)经终浓度分别为20umol/L、40umol/L、80umol/L JAK激酶抑制剂AG490处理HCE1细胞24h时,细胞抑制率分别为9.5%±0.66%、17.1%±1.51%、33.3%±1.77%,48h时,细胞抑制率分别为28.0%±2.27%、45.2%±3.15%、66.0%±2.95%,72h时,细胞抑制率分别为39.4%±2.81%、66.2%±7.02%、81.5%±1.78%;经终浓度分别为20ug/mL、40ug/mL、80ug/mL顺铂处理HCE1细胞24h时,细胞抑制率分别为3.6%±0.56%、6.5%±0.98%、14.1%±2.52%,48h时,细胞抑制率分别为6.5%±0.46%、9.9%±1.35%、20.0%±3.05%,72h时,细胞抑制率分别为14.1%±3.05%、42.1%±3.90%、59.4%±4.26%;联合处理组以48小时20 umol/L AG490联合20ug/mL顺铂对HCE1细胞的增殖抑制作用为例,细胞增殖抑制率为30.2%±3.34%,综上可见AG490和顺铂以时间和剂量依赖性特点抑制宫颈癌细胞的增殖,JAK激酶抑制剂AG490联合顺铂对人宫颈癌HCE1细胞的增殖抑制具有协同作用。(3)流式细胞仪细胞周期分析表明,AG490处理组G1期细胞比例有所增加,S期细胞比例明显降低,顺铂处理组G1期细胞比例明显降低,反之S期细胞比例明显升高,AG490联合顺铂处理组G1期细胞比例和S期细胞比例介于AG490处理组和顺铂处理组之间。以20umol/LAG490作用HCE1细胞48小时为例,G1期细胞比例和S期细胞比例分别为86.0%±3.01%、9.1%±0.66%,40ug/mL顺铂作用HCE1细胞48小时G1期细胞比例和S期细胞比例分别为2.1%±0.26%、92.2%±6.24%,20umol/LAG490联合40ug/mL顺铂作用HCE1细胞48小时G1期细胞比例和S期细胞比例分别为13.2%±0.78%、80.5%±2.46%。(4)细胞凋亡分析表明,AG490处理组细胞凋亡率较对照组升高,呈时间和剂量依赖性特点;顺铂处理组细胞凋亡率较对照组也升高,呈时间和剂量依赖性特点;AG490联合顺铂处理组细胞凋亡率较单药处理组高。(5)实验组各组和对照组比较,HCE1细胞中P53蛋白表达明显上调,差别有统计学意义(Pearson X~2=10.072,P＜0.05)。结论:1 JAK激酶抑制剂AG490使凋亡细胞明显增多,并以时间和剂量依赖性抑制宫颈癌HCE1细胞的增殖,改变细胞周期分布、促进细胞凋亡。2 JAK激酶抑制剂AG490通过抑制JAK/STAT信号途径而上调P53蛋白的表达来抑制宫颈癌HCE1细胞的增殖,促进细胞凋亡。3 JAK激酶抑制剂AG490与顺铂联合对宫颈癌HCE1细胞的抑制作用明显增强,提示AG490与顺铂联合对宫颈癌HCE1细胞的增殖抑制产生协同作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词语表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 第三章 实验结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢