大豆疫霉菌卵孢子萌发及单卵孢株毒性纯系的研究

论文摘要

在某些大豆生产区,由大豆疫霉菌引起的大豆根茎腐烂病是一种普遍流行的、极具破坏性的病害,病原真菌以卵孢子在土壤中越冬,在条件适宜时导致下一年大豆发生根茎腐烂。卵孢子通常休眠一段时间后才萌发,这阻碍了大豆疫霉菌有性生殖后代毒性的遗传和变异研究。本文测定了不同培养基、水量、农作物根渗出液、温度、光照对大豆疫霉菌卵孢子萌发影响,比较了大豆疫霉菌株间卵孢子萌发的差异,筛选出萌发率较高的菌株和适于卵孢子萌发的条什组合;通过继代单卵孢株分离培养和毒性鉴定,建立了大豆疫霉菌单卵孢株毒性纯系,并分析了单卵孢株毒性纯系后代群体ISSR分子指纹,结果如下: 1.不同培养基上卵孢子的萌发率存在很大差异,CA和S+L培养基上的卵孢子均不萌发。当平皿中存在3mL水时,卵孢子萌发率最高,为80.9%。大豆感病品种sloan的根渗出液能明显促进卵孢子的萌发,而用大豆抗病品种绥农11和小麦品种龙麦29的根渗出液处理后的卵孢子萌发率与清水对照无差异:与清水对照相比,玉米品种本育9的根渗出液对卵孢子萌发有明显的抑制作用。不同大豆疫霉菌株萌发率存在显著差异,以Ps-597-3萌发率最高,达到80.0%。26℃对卵孢子萌发最合适,萌发率高达83.5%。持续黑暗、12h光照12h黑暗交替以及连续光照3种光照处理间无明显差异,说明光照对大豆疫霉菌卵孢子萌发没有影响。 2.将大豆疫霉菌供试菌株Ps-H2（生理小种1号）每代挑取30个单卵孢株,进行生理小种鉴定,随机挑选1株1号生理小种的单卵孢株继续进行单卵孢株分离和毒性鉴定,连续两代试验结果表明大豆疫霉菌原始菌株并朱出现毒性分化,表明原始菌株即为1号生理小种的毒性纯系。 3.用7个ISSR引物对18个1号生理小种的单卵孢株毒性纯系进行DNA指纹分析,聚类分析结果表明,ISSR在引物选用恰当的情况下,能够将参试的大豆疫霉菌1号生理小种的大多数菌株分为一类。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1.大豆疫霉菌根腐病研究概况
• 1.2 研究的目的和意义
• 1.3 研究内容和试验总体设计
• 1.3.1 大豆疫霉菌卵孢子诱导萌发条件
• 1.3.2 大豆疫霉菌单卵孢株毒性纯系的建立
• 1.3.3 大豆疫霉菌单卵孢株毒性纯系后代ISSR分析
• 2 文献综述
• 2.1 疫霉菌藏卵器、卵孢子和雄器的形态特征
• 2.2 疫霉菌的有性生殖
• 2.2.1 疫霉菌的交配型
• 2.2.2 疫霉菌的有性生殖过程
• 2.3 疫霉菌的遗传与变异
• 2.3.1 同宗配合特性的遗传与变异
• 2.3.2 交配型的遗传与变异
• 2.3.3 生长速率的遗传与变异
• 2.3.4 菌落形态的遗传与变异
• 2.3.5 毒性的遗传与变异
• 2.3.6 抗药性的遗传与变异
• 2.4 影响疫霉菌卵孢子萌发的因素
• 2.4.1 卵孢子亲本菌株的生理特性
• 2.4.2 光照条件
• 2.4.3 卵孢子龄期
• 2.4.4 温度
• 2.4.5 营养条件
• 2.4.6 土壤微生物的代谢产物
• 2.4.7 化学物质刺激
• 2.5 大豆疫霉菌生理分化现象
• 2.6 大豆疫霉菌毒性检测鉴定方法
• 2.6.1 传统方法
• 2.6.2 分子生物学方法
• 3 材料与方法
• 3.1 大豆疫霉菌卵孢子萌发条件研究
• 3.1.1 供试菌株及来源
• 3.1.2 培养基
• 3.1.3 卵孢子悬浮液的制备
• 3.1.4 预处理打破卵孢子休眠
• 3.1.5 卵孢子萌发条件的筛选
• 3.2 大豆疫霉菌单卵孢株毒性纯系的建立
• 3.2.1 供试菌株
• 3.2.2 单卵孢子分离及继代单卵孢株系的建立
• 3.2.3 继代单卵孢株毒性鉴定
• 3.3 大豆疫霉菌单卵孢株毒性纯系的ISSR分析
• 3.3.1 供试菌株及其培养
• 3.3.2 DNA的提取
• 3.3.3 大豆疫霉菌总DNA检测和纯度检测
• 3.3.4 ISSR引物及扩增反应条件
• 3.3.5 PCR反应结果的检测
• 4 结果与分析
• 4.1 大豆疫霉菌卵孢子萌发条件研究
• 4.1.1 培养基对卵孢子萌发的影响
• 4.1.2 水量对卵孢子萌发的影响
• 4.1.3 农作物根渗出液对卵孢子萌发的影响
• 4.1.4 大豆疫霉菌株间卵孢子萌发的差异比较
• 4.1.5 温度对卵孢子的萌发的影响
• 4.1.6 光照对卵孢子萌发的影响
• 4.2 大豆疫霉菌继代单卵孢株毒性纯系的建立
• 4.3 大豆疫霉菌单卵孢毒性纯系ISSR分析
• 4.3.1 总DNA检测
• 4.3.2 ISSR分析
• 5 讨论
• 5.1 关于大豆疫霉菌卵孢子萌发条件
• 5.2 关于大豆疫霉菌单卵孢毒性纯系的建立
• 5.3 关于大豆疫霉菌生理小种鉴别方法
• 6 结论
• 致谢
• 参考文献
• 图版及说明
• 攻读学位期间发表的学术论文