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木荷抗稻瘟病菌活性皂甙的分离与鉴定

2020-12-11阅读(601)

木荷抗稻瘟病菌活性皂甙的分离与鉴定

论文摘要

从木荷（Schima superbα）中寻找抗稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）活性物质,本文采用琼脂扩散法跟踪,对木荷不同部位、不同季节以及不同有机溶剂提取物级分的抗稻瘟病活性进行差异性分析,结果显示,下半年木荷叶的活性最强,在10mg/ml的浓度下,其抑菌率达64.79%。而且其乙醇提取物的水饱和正丁醇级分抑菌活性最强,在1.5228mg/ml的浓度下,其抑制率为58.63%。然后对水饱和正丁醇级分依次采用大孔树脂柱层析,硅胶柱层析,RP－18柱层析进行分离纯化,同时各个级分抗稻瘟病活性的EC5o浓度分别为：M2I级分的EC5o为1.1804mg/ml;M2IG级分的EC5o为0.54811mg/ml; M2IGR5级分的EC5o为0.0984mg/ml; M2IGR5R1级分的EC50为0.0538mg/ml; M2IGR5R2级分的EC50为0.0680mg/ml; M2IGR5R3级分的EC50为0.1039mg/ml; M2IGR5R4级分的EC50为0.0926mg/ml；最后对M2IGR5R1级分采用制备式高效液相进行纯化,获得两个齐墩果烷型皂甙,进一步经过ID,2D-NMR、质谱、红外和紫外等光谱手段鉴定,并结合化合物酸水解、气相色谱单糖分析,确定两种化合物分别为：化合物1：21,22-二-O-当归酰基-R1-玉蕊醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→2）-β-D-吡喃半乳糖基-（1→2）-[α-L－吡喃鼠李糖基-（1→4）]-β-D-吡喃葡萄糖酸甙。即是：21,22-di-O-angeloyl-R1-barrigenol-3-O-β-D-glucopyranosyl-（1→2）-/β-D-galactopyranosyl-（ 1→2）-[α-L-rhamnopyranosyl-（1→4）]-β-D-glucuronopyranosiduronic acid,命名为：superboside A（木荷皂甙A）；化合物2：21.22-二-O-当归酰基-R1-玉蕊醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→2）-β-D-吡喃木糖基-（1→2）-[α-L-吡喃鼠李糖基-（1→4）]-β-D-吡喃葡萄糖酸甙。即是：21,22-di-O-angeloyl-R1-barrigenol-3-O-β-D-glucopyranosyl-（1→2）-β-D-xylopyranosyl-（1→2）-[a-L-rhamnopyranosyl-（1→4）]-β-D-glucuronopyranosiduronic acid,命名为：superboside B（木荷皂甙B）；经数据库验证,该两种化合物为首次分离得到的新化合物。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 文献综述
  • 1.1 木荷及同科属植物的生物活性
  • 1.2 木荷及其同科属植物的化学成分
  • 1.3 木荷及其同科属植物的生物活性与化学成分的关系
  • 1.4 本研究的基本思路
  • 第二章 材料与方法
  • 2.1 材料试剂和仪器
  • 2.1.1 木荷叶、树枝皮、根茎皮样品
  • 2.1.2 供试病原菌株
  • 2.1.3 培养基
  • 2.1.4 分离用固定相材料及主要试剂
  • 2.1.5 主要仪器
  • 2.2 方法
  • 2.2.1 木荷抗稻瘟病真菌活性化学成分的提取
  • 2.2.2 大孔吸附树脂初步分离木荷抗稻瘟病真菌活性成分
  • 2.2.3 硅胶柱层析法分离抗稻瘟病真菌活性成分
  • 2.2.4 RP-18柱纯化抗稻瘟病真菌活性成分
  • 2.2.5 RP-18柱再次纯化抗稻瘟病真菌活性成分
  • 2.2.6 半制备HPLC纯化抗稻瘟病真菌活性成分
  • 2.2.7 抗稻瘟病菌活性成分的生物和化学检定
  • 2.2.8 抗稻瘟病菌活性成分的波谱分析
  • 2.2.9 活性成分的酸水解
  • 2.2.10 皂苷元分析
  • 2.2.11 单糖绝对构型确定
  • 第三章 结果与分析
  • 3.1 获得木荷中抗稻瘟病菌活性成分的取材部位和季节的确定
  • 3.1.1 木荷树叶、树皮、树根皮化学成分的预实验
  • 3.1.2 木荷三部位乙醇级提取物对植物病原菌的抗菌性
  • 3.2 提取木荷抗稻瘟病菌活性成分的技术路线和各步骤技术参数
  • 3.3 大孔吸附树脂初步分离木荷抗稻瘟病菌活性成分的条件选择
  • 3.3.1 树脂型号的选择及装柱
  • 3.3.2 洗脱的温度和流速
  • 3.3.3 洗脱方式和流动相组成
  • 3.3.4 上样量和级分收集与判别
  • 3.4 硅胶柱层析法分离木荷抗稻瘟病菌活性成分的条件
  • 3.4.1 硅胶颗粒与装柱
  • 3.4.2 洗脱条件
  • 3.4.3 上样量和级分收集与判别
  • 3.5 RP-18柱纯化活性成分的条件
  • 3.5.1 RP-18柱材料颗粒与装柱
  • 3.5.2 洗脱条件
  • 3.5.3 上样量和级分收集与判别
  • 3.6 RP-18柱再纯化活性成分的条件
  • 3.6.1 四级分的HPLC分析
  • 3.6.2 抑菌率差异性比较
  • 3.6.3 抑菌图片
  • 3.7 各活性成分度纯度检验
  • 3.7.1 两皂苷的HPLC纯度检验
  • 3.7.2 皂苷元的HPLC纯度检验
  • 3.8 化合物的结构解析
  • 3.8.1 新化合物的结构解析
  • 3.8.2 化合物理化及波谱数据
  • 3.8.3 单糖绝对构型的确定
  • 第四章 小结与讨论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 个人简历
  • 化合物图谱

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