细胞表面膜蛋白NECL2相互作用蛋白的鉴定及其功能研究

论文题目: 细胞表面膜蛋白NECL2相互作用蛋白的鉴定及其功能研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 生物化学与分子生物学

作者: 徐雅琴

导师: 强伯勤,袁建刚,彭小忠

关键词: 细胞表面膜蛋白,细胞粘附分子,分化,凋亡

文献来源: 中国协和医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 细胞表面膜蛋白是沟通细胞内部与外环境的桥梁，对于细胞行使正常的生理功能非常重要。为了在神经系统中寻找能够与蛋白4.1家族和MAGUK家族成员相互作用的细胞表面膜蛋白，我们以红细胞表面糖脂膜蛋白Glycophorin C胞内区为线索，克隆得到一个新的人cDNA序列，因其编码的蛋白质结构与Nectin家族成员类似，故命名为NECL2(Nectin Like Protein 2)。经表达谱分析发现，NECL2在多组织中广泛表达，如脑、心、肝、肺、骨骼肌等。为了解NECL2在神经系统中的作用，我们通过原位杂交和免疫组织化学方法，研究NECL2在中枢神经系统的具体表达情况，结果显示NECL2主要表达于大脑皮层，海马多形性细胞层，齿状回，小脑蒲肯野细胞层，纹状体、脑桥面神经核和脊髓前角运动神经元，而在体外原代培养的神经细胞中，NECL2在神经元的胞体和突起部位均有分布。大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12具有神经元样分化的潜能，在PC12细胞中转染并过量表达NECL2能够诱导细胞发生神经元样分化。在神经系统中，蛋白4.1家族是一类重要的细胞骨架相关蛋白，我们分别通过体外蛋白结合实验以及细胞免疫荧光共定位实验，证明NECL2能够与蛋白4.1家组成员DAL-1相互作用，为阐明NECL2诱导PC12细胞神经元样分化现象的机制提供了线索。鉴于NECL2能在生物体多种组织中表达，我们曾经观察该基因在肿瘤细胞中的表型，发现NECL2能够诱导急性粒性白血病细胞系NB4发生凋亡，为进一步探索该现象的分子机制，利用酵母双杂交技术，以NECL2的胞内区为诱饵筛选人胎脑文库，发现了一个可能的相互作用蛋白cFLIP。cFLIP是一个凋亡相关蛋白，其结构与caspase家族成员类似，能够参与多种凋亡信号途径的传导，经过体外、体内蛋白结合实验和细胞免疫荧光激光共聚焦显微镜观察，初步确定NECL2与cFLIP之间相互作用。我们认为NECL2有可能通过与多个蛋白相互作用，参与神经元分化和肿瘤细胞凋亡等过程。

论文目录:

中文摘要

英文摘要

前言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

小结

参考文献

论文综述

附录

致谢

发布时间: 2006-10-13

参考文献

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