论文摘要
第二部分BMSCs/BMP-2/β-TCP-透明质酸钠复合支架裸鼠体内构建组织工程软骨的实验研究目的探讨以骨形态发生蛋白-2（BMP-2）/β-磷酸三钙-透明质酸钠（β-TCP-HA）三维支架复合间充质干细胞（MSCs）在裸鼠体内构建组织工程软骨的可行性。方法MSCs的分离和培养:拉颈处死2周龄实验SD大鼠,酒精浸泡消毒后取双侧股骨和胫骨,1ml注射器吸取含10%FBS的L-DMEM培养液反复冲洗骨髓腔,将冲出的骨髓液离心后弃上清获取细胞,经贴壁法提纯扩增培养大鼠MSCs至第3代。细胞支架的构建和实验分组:分别构建实验组:rhBMP-2/β-TCP-HA、对照组:rhBMP-2/β-TCP及空白组:β-TCP复合支架。利用负压吸引将MSCs种子细胞分别接种于支架内,并植于裸鼠皮下。实验观察指标:术后12周肉眼观察所获组织工程软骨的外观;HE染色观察各组软骨细胞形态及分布;甲苯胺蓝染色观察各组软骨细胞糖胺多糖（GAG）分泌情况;Ⅱ型胶原免疫组化染色观察各组软骨细胞胶原分泌。结果大体标本观察:实验组组织工程软骨体积较大较厚,柔韧有弹性,表面光滑,白色有光泽;对照组组织工程软骨体积稍小,表面欠平整,缺乏弹性;空白组移植物体积较小,表面粗糙,质地较硬脆。HE染色结果:实验组支架降解完全,软骨细胞外基质丰富;对照组支架大部降解,支架内形成岛状软骨增生;空白组支架部分降解,以纤维组织和脂肪组织为主,仅在支架边缘见少量软骨组织。GAG及Ⅱ型胶原免疫组化染色结果:实验组均呈强阳性:对照组GAG及Ⅱ型胶原免疫组化染色呈阳性;空白组GAG及Ⅱ型胶原免疫组化染色呈阴性。结论MSCs/rhBMP-2/β-TCP-HA复合支架提供了一条可能有效的关节软骨修复途径,是目前软骨组织工程较为理想的细胞支架材料。第三部分BMSCs/BMP-2/β-TCP-透明质酸钠复合支架修复兔关节软骨缺损的实验研究目的观察兔自体间充质干细胞（MSCs）/骨形态发生蛋白-2（BMP-2）/β-磷酸三钙-透明质酸钠（β-TCP-HA）复合支架修复兔关节软骨缺损的实验效果。方法MSCs的获取和培养:4月龄,2公斤左右新西兰大白兔耳缘静脉麻醉后,切开左胫前内侧皮肤,暴露胫骨,利用腰穿针抽取骨髓,经贴壁法提纯扩增培养自体MSCs至第3代。细胞支架的构建和分组:24只新西兰兔随机分为四组,于股骨髁关节面制备关节软骨缺损模型（每孔直径4mm、深度6mm）。实验组、对照组Ⅱ及对照组Ⅰ关节缺损处分别植入MSCs/rhBMP-2/β-TCP-HA、MSCs/rhBMP-2/β-TCP和MSCs/β-TCP复合支架,空白组不作处理。观察指标:于术后12周对修复组织行大体、组织学及免疫组化观察。结果实验组能形成丰富的透明软骨样修复组织,与周围组织整合良好;对照组Ⅱ以不成熟透明软骨及纤维软骨为主,与周围组织分界略模糊;对照组Ⅰ纤维软骨修复为主,与周围组织分界清;空白组无修复组织。Wakitani评分各组间差异均有统计学意义（P＜0.01）,实验组明显优于其他组。结论MSCs/rhBMP-2/β-TCP-HA复合支架材料构建组织工程软骨,是一种修复关节软骨缺损行之有效的方法。
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