论文题目: 表达hCGβ-C3d3融合蛋白的乳酸杆菌活疫苗粘膜免疫增强抗hCGβ免疫效应机制
论文类型: 博士论文
论文专业: 妇产科学
作者: 姚晓英
导师: 李大金
关键词: 重组乳酸杆菌,活疫苗,分子佐剂,粘膜免疫及其机制
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的：将含有融合基因hCGβ-C3d3的质粒转化干酪乳酸杆菌，对比表达hCGβ的重组乳酸杆菌活疫苗Lb.hCGβ或Lb.hCGβ-C3d3经不同粘膜途径接种不同品系小鼠，产生抗hCGβ免疫应答，验证C3d3在表达hCGβ重组乳酸杆菌活疫苗粘膜免疫中的佐剂作用；探讨C3d3在表达hCGβ重组乳酸杆菌活疫苗粘膜免疫中增强hCGβ免疫原性的效应机制。 方法：用分子生物学技术构建质粒pIlac.hCGβ-C3d3，电穿孔转化干酪乳酸杆菌（Lactobacillus casei）CECT 5276，挑选转化后的耐药菌落，在含红霉素的MRS培养基中培养，0.5％乳糖诱导后，在不同时间取上清，化学发光法检测hCGβ，Western blot鉴定表达产物，细胞免疫化学鉴定融合蛋白。用108，109，1010个重组乳酸杆菌Lb.hCGβ或Lb.hCGβ-C3d3分别经消化道、呼吸道和阴道粘膜接种6-8周龄雌性BALB／c和C57BL／6小鼠，3周后用相同剂量加强免疫一次。间接ELISA检测初次接种后2—8周血清和阴道灌洗液中抗hCGβ IgG和IgA抗体滴度；以及抗血清中和hCG抗原的活性。用1010个重组乳酸杆菌Lb.hCGβ或Lb.hCGβ-C3d3分别经口腔、鼻腔和阴道粘膜接种6-8周龄雌性BALB／c和C57BL／6小鼠，分离免疫小鼠脾、子宫、阴道中的淋巴细胞，流式细胞仪分析其B和T细胞的增殖情况，ELISpot分析其分泌抗hCGβ IgG和IgA抗体的抗体分泌细胞克隆数。 结果：经测序质粒构建成功；转化成功的重组干酪乳酸杆菌在乳糖诱导下可分泌融合蛋白hCGβ-C3d3。在不同品系的小鼠体内109，1010Lb.hCGβ可诱导相似的免疫应答，而108诱导的抗体滴度较低。三种粘膜免疫途径诱导的免疫应答相似。加强免疫后109和1010 Lb.hCGβ诱导的抗血清中和hCG抗原的能力＞100ng／ml。阴道粘膜接种诱导的最高抗体滴度不低于、甚至优于其他两种粘膜接种途径。用Lb.hCGβ-C3d3接种诱导的最高效价比Lb.hCGβ高2—100倍，加强接种后抗血清能有效中和hCG抗原的生物学活性。重组乳酸杆菌至少可在BALB／c小鼠阴道粘膜内存活3周。与Lb.hCGβ相比，Lb.hCGβ-C3d3粘膜接种后T和B细胞增殖能力明显增强（p＜0.05）。脾脏内IgG及IgA抗体分泌细胞个数在Lb.hCGβ或Lb.hCGβ-C3d3各种免疫途径间无显著差异（p＞0.05）；但Lb.hCGβ-C3d3粘膜接种后子宫及阴道内IgG及IgA抗体分泌细胞个数均显著高于Lb.hCGβ（p＜0.05）。 结论：实现了重组乳酸杆菌Lb.hcGβ-C3d3分泌性表达融合蛋白hCGβ-C3d3，培养4小时后0.5％乳糖诱导是重组菌表达hCGβ的优化条件。重组乳酸杆菌活疫苗Lb.hCGβ可经粘膜免疫诱导有效的免疫应答，产生的应答能力与免疫剂量有关。阴道粘膜接种可能是一种诱导生殖道粘膜免疫的较好途径。用表达hCGβ重组乳酸杆菌活疫苗粘膜免疫不同品系小鼠，C3d3均能增强机体对hCGβ抗原的体液免疫应答。显著刺激T和B细胞增殖；显著增加子宫及阴道内抗hCGβ IgG和IgA抗体的抗体分泌细胞克隆数，可能是C3d3在粘膜免疫中增强体液免疫的机制。
论文目录:
中文摘要
英文摘要
引言
(1) 避孕疫苗出现的机遇与挑战
(2) 分子佐剂C3d3选择性增强体液免疫
(3) 粘膜免疫可诱导生殖道抗体
(4) 乳酸杆菌可作为工程菌表达外源蛋白
第一部分:hCGβ-C3d3融合蛋白在乳酸杆菌的表达及鉴定
材料与方法
材料
方法
结果
讨论
第二部分:表达hCGβ-C3d3的重组乳酸杆菌经小鼠阴道接种的免疫效果
材料与方法
材料
方法
结果
讨论
第三部分:表达hCGβ-C3d3的重组乳酸杆菌经小鼠口腔接种的免疫效果
材料与方法
材料
方法
结果
讨论
第四部分:表达hCGβ-C3d3的重组乳酸杆菌经小鼠鼻腔接种的免疫效果
材料与方法
材料
方法
结果
讨论
展望
结论
参考文献
附:
综述一
综述二
综述三
论文一
论文二
研究生期间完成的综述及论著
致谢
发布时间: 2007-06-27
参考文献
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