论文摘要
本文回顾了表面等离子激元共振(SPR)传感器的发展历史并简单介绍了SPR在大量生物体系中的应用。由于SPR传感器不需要标记就可以直接测量生物分子间的相互作用,使其成为研究生物分子作用表征和定量的重要手段。与其他技术如酶、放射标记等相比较,SPR技术以其快速、高灵敏度的特性被广泛的应用到生物分子机制的研究中去,包括蛋白相互作用,抗原/抗体作用,配体/受体相互作用等。本论文使用SPR与流动注射(FI)联用装置,研究了药物与蛋白的相互作用和新的DNA序列放大检测两个不同体系。通过层层自组装方法,将11-巯基十一酸(MUA)固定在金膜表面上,再利用NHS/EDC对羧基的活化将牛血清白蛋白(BSA)固定到MUA上,形成单分子层的BSA膜,未反应的MUA分子的活性基团再用氨基乙醇(AE)进行封闭,使形成的SPR芯片表面只裸露BSA的活性基团。流动注射药物双氯酚酸钠(DFS),当DFS分子与BSA相互作用时,产生SPR信号变化。研究表明不同浓度DFS浓度为50~300μmol/L时,SPR的信号变化与浓度呈现良好的线性关系。说明在一定条件下,BSA与DFS有相互作用,对了解药物的特性有一定的理论意义。另外实验设计的BSA芯片,可以用来研究其它药物与BSA的相互作用,这一模板在研究药物-蛋白作用中具有通用性。实验通过形成“三明治”结构多层单分子膜,在检测探针寡核苷酸末端标记有生物素(Biotin),再通过抗生素-过氧化物酶共聚体(SA-HRP)将酶修饰到DNA芯片表面,当4—氯萘酚(CN)和双氧水混合液与过氧化物酶相遇时,形成相应的沉淀,覆盖在自组装分子层上。实验采用FI-SPR方法测定,由于沉淀的生成使SPR信号急剧变化,放大,得到很低的检测限。该实验可重复且选择性高,得到的检测限为10 fmol/L。
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标签:表面等离子激元共振论文; 牛血清白蛋白论文; 双氯酚酸钠论文; 酶沉淀论文; 放大论文;