论文摘要
前言高盐饮食和幽门螺杆菌(H.pylori)感染都是胃癌发生的重要危险因素,二者并存时彼此之间是否相互影响以及是否对胃癌的发生产生作用尚不清楚。辽宁庄河是我国北方胃癌高发区,当地居民90%以上食用咸猪肉。本室前期工作发现当地H.pylori检出率高达79.33%,与胃癌低发区相比差异显著。通常情况下,H.pylori对生存环境的要求较高,在自然环境下很难生存。最近,本室首次从庄河特色食物——盐腌咸猪肉中培养出H.pylori。但是,在高盐环境中H.pylori的生物学特性是否发生改变,其致病作用是否发生变化,毒力如何,目前还不清楚。本研究观察咸猪肉源性和人胃粘膜源性H.pylori对体外培养的GES-1细胞的损伤作用,以期明确咸猪肉源性H.pylori的致病性;以8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)为损伤标志物,检测其在共培养前后GES-1细胞的表达并对其表达量进行分析,以比较咸猪肉源性和人胃粘膜源性H.pylori的毒力大小,期望阐明咸猪肉源性H.pylori引起胃粘膜损伤的分子机制。实验方法在微需氧的条件下,进行咸猪肉源性和胃粘膜源性H.pylori的分离复苏培养及鉴定,将咸猪肉源性H.pylori编号为X27,将胃粘膜源性H.pylori编号为B975。经细菌培养的菌落特征、形态学染色、PCR、测序等方法证实该菌为H.pylori。PCR反应证实两株菌毒力基因型均为cagA+vacAs1+/mlb+。在37℃,5%CO2,饱和湿度的环境培养GES-1细胞,利用细胞和H.pyiori共培养技术,观察咸猪肉源性和人胃粘膜源性H.pylori对体外培养的GES-1细胞的损伤作用,采用激光扫描共聚集显微镜技术,检测8-OHdG在共培养后的GES-1细胞中的表达,并采用统计软件SPSS11.5对数据进行统计学分析。以不加菌的GES-1细胞为对照组。结果一、GES-1和H.Pylori共培养后形态学观察以不加菌的GES-1细胞为对照,在倒置相差显微镜下观察,其呈菱形或多边形等不规则形状;贴壁,生长旺盛,偶见漂浮细胞;细胞之间连接紧密。以与X27和B975共培养的GES-1细胞为实验组,在倒置相差显微镜下观察发现,加入X27和B975后,GES-1细胞变圆;贴壁细胞减少,悬浮细胞增多,可见空泡变性,并且细胞周围出现碎片;细胞之间连接减少甚至消失;细胞核和细胞质分界模糊,呈现核质融合状态;X27和B975两组之间形态学改变无明显差别。二、GES-1和H.pylori共培养后8-OhdG表达观察采用激光扫描共聚集显微镜方法观察发现,对照组GES-1呈菱形或多边形等不规则形状,8-OhdG很少表达,荧光较弱;与X27和B975共培养24h后GES-1细胞变圆,几乎所有细胞胞浆内都有8-OhdG表达,而且荧光增强。三、成猪肉源性和胃粘膜源性H.pylori对GES-1损伤作用的定量比较以平均荧光强度作为与咸猪肉源性和胃粘膜源性H.pylori共培养后GES-1细胞8—OHdG的相对表达量,应用SPSS11.5进行统计学分析发现,X27和B975两个实验组与对照组相比均具有统计学意义(p<0.01);X27组高于B975组,二者相比具有统计学意义(p<0.01)。结论1.咸猪肉源性和胃粘膜源性H.pylori对GES-1细胞均具有损伤作用。2.咸猪肉源性和胃粘膜源性H.pylori均可以引起8-OhdG表达升高,这可能是H.pylori导致胃黏膜上皮细胞DNA分子氧化性损伤的机制之一。3.在相同基因亚型条件下,咸猪肉源性比胃黏膜源性H.pylori毒力更强。
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