论文摘要
1空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni, C. jejuni, Cj)是细菌性腹泻最常见的致病菌之一,吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barre syndrome, GBS)是C. jejuni感染后的严重并发症。近年来随着神经生理和病理学的研究进展,将GBS重新划分为急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病(AIDP)、急性运动轴索性神经病(AMAN)、急性运动感觉性轴索性神经病(AMSAN)、Miller-Fisher综合征(MFS)等几种亚型。GBS的发生常与C. jejuni某些特定的血清型有关,在我国最常见的为O:19。本研究从基因突变的角度出发,选择本地区的具有致GBS致病性的空肠弯曲菌菌株,针对不同的基因片段(鞭毛flaA,脂寡糖wla基因簇),与NCTC11168序列比对分析,观察基因突变与致GBS的关联。方法细菌培养选取AMAN型GBS病人来源的C.jejuni菌株,菌株经鸡、猴等动物模型证实为GBS的AMAN型致病菌株。血清分型为pennerO:19型。采用李春岩院士的培养方法培养Cj。DNA提取应用promega公司的Wizard基因提取试剂盒,提取Cj基因组DNA。PCR扩增参考以往文献,进行PCR扩增,经电泳证实PCR产物。测序PCR产物经电泳证实后,由上海生物公司测序。序列分析应用DNAstar4.0软件和NCBI数据库的BLAST,与已公布基因组全序列的空肠弯曲菌NCTC11168菌株序列进行对比分析。结果1本研究菌株与NCTC11168菌株序列分析结果表示在两株菌株之间,核苷酸序列同源性达97%以上。2 flaA基因和wla基因簇不同基因片断,核苷酸突变的数量不同,以flaA基因和wlaF突变最多,分别为20个核苷酸突变;15个核苷酸突变。3氨基酸变异与核苷酸突变相似,以flaA基因和wlaF最多,分别13个氨基酸变异;60个氨基酸变异,并且由于wlaF序列存在5个核苷酸缺失,引起连续的氨基酸变异。结论通过与NCTC11168序列对比分析,发现在flaA基因和wla基因簇共存在90处的核苷酸突变和91处氨基酸变异.本研究从分子遗传水平了解C. jejuni致GBS的发病机制,并为进一步研究GBS相关C. jejuni的分子生物学特征奠定基础。
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