论文题目: 抗SARS病毒人源Fab抗体的制备研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 微生物学
作者: 康晓平
导师: 祝庆余
关键词: 病毒,噬菌体表面展示,人源抗体,中和活性
文献来源: 中国人民解放军军事医学科学院
发表年度: 2005
论文摘要: SARS冠状病毒引起的严重呼吸系统综合症,具有很高的传染性和致死率,目前尚无特异性预防及治疗药物,研究抗SARS病毒人源抗体被动免疫,将有助于对SARS病人的救治。 目前噬菌体抗体库技术已成为人源抗体制备的强有力工具,它易于操作,筛选容量大,有利于获得一些稀有抗体,并可直接获得完全人源的单克隆抗体。本研究工作可分为4个部分:抗体库的构建、抗体库的富集及特异性单克隆抗体的筛选、中和抗体MlA的可溶性表达及纯化、MlA抗体活性的定量分析。 一、噬菌体抗体库的构建 建立人抗SARS病毒Fab抗体基因库的淋巴细胞来源于恢复期SARS患者的外周血,免疫荧光及体外中和试验检测抗SARS病毒抗体的滴度≥1:256及1:64,这为建立可能筛选出高亲和力的抗体基因库创造了条件。提取淋巴细胞RNA,利用RT-PCR方法克隆出7条重链Fd段抗体基因和9条轻链抗体基因,依次将轻链基因混合物和重链基因混合物酶切后连入载体pComb3内,构建成人源Fab分子噬菌体表面呈现文库,库容约2×10~6。 二、抗体库的富集及特异性单克隆抗体的筛选 目前大量研究结果表明,SARS病毒的4个主要结构蛋白中,S蛋白的主要功能是通过特异受体介导病毒与靶细胞结合,引起细胞融合,它是宿主免疫应答的重要靶位。从抗体库中筛选抗SARS病毒中和抗体,以S蛋白作为筛选靶标,对抗体库进行了富集筛选,经过4轮的“吸附结合-洗脱-扩增”过程,富集了抗S蛋白噬菌体抗体库。 人源单克隆抗体的筛选分为两个过程,结合特异性和中和活性的筛选。首先确立了可靠的双抗体夹心ELISA方法检测抗S蛋白特异性抗体。从50株随机挑取的Fab抗体克隆中筛选出12株抗S蛋白特异性抗体,然后测定其对SARS病毒的中和活性,筛选到一株抗体,有明显的抗SARS病毒中和活性,可推迟细胞病变的发生,编号为MlA;基因测序分析表明MlA抗体的轻链为V_k 3a家族基因,重链为V_H3家族基因。
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
第一章 抗SARS病毒人源噬菌Fab体抗体库的构建
材料与方法
结果与分析
讨论
小结
第二章 抗体库的富集集及抗SARS病毒中和抗体的筛选
材料与方法
结果与分析
讨论
小结
第三章 MlA抗体在PET载体内的表达研究
材料与方法
结果与分析
讨论
小结
第四章 MIA抗体活性的定量分析
材料与方法
结果与分析
讨论
小结
总结
参考文献
致谢
附录 缩略语
综述一：人源化抗体在病毒性疾病治疗中的研究进展
综述二：急性呼吸系统综合症预防及治疗研究进展
发表文章
参加会议
附录 人源抗SARS病毒噬菌体抗体库的构建及筛选
发布时间: 2005-09-05
参考文献
- [1].小鼠TLR-2的克隆、表达及其抗体的生物活性研究[D]. 赵文忠.第一军医大学2004
- [2].抗人类肺动脉内皮细胞自身抗体的检出及肺血管内皮损伤机制的研究[D]. 郭生玉.中国医科大学2007
- [3].抗IgE抗体的设计与研制[D]. 乔春霞.中国人民解放军军事医学科学院2008
- [4].特定人群HSP70基因多态性及抗原抗体水平的研究[D]. 周舫.郑州大学2003
相关论文
- [1].人源性抗核抗体Fab片段抗体库的构建筛选及鉴定[D]. 钱新宇.南方医科大学2008
- [2].人源性抗角蛋白单链抗体的构建、表达和Fab片段生物学作用及其分子机理的研究[D]. 李承新.第四军医大学2001
- [3].全合成人源抗体库和人源化改型抗体库的构建及筛选[D]. 王尚资.中国海洋大学2004
- [4].SARS-CoV免疫噬菌体抗体库的构建及筛选[D]. 李郁.第四军医大学2005
- [5].抗人肝癌基因工程抗体单双价嵌合Fab的构建和在大肠杆菌及毕赤酵母中的表达[D]. 董红霖.第四军医大学2005
- [6].蛋白质组学方法筛选肺癌相关蛋白及人源性肺癌单链抗体库的构建[D]. 张慧珍.郑州大学2005
- [7].SARS病毒特异性抗原抗体基因和N基因的研究[D]. 刘正学.武汉大学2005
- [8].人肺癌单链抗体库的构建、筛选及其抗体结构与功能的研究[D]. 晏向华.浙江大学2006
- [9].人天然Fab段噬菌体抗体库的构建及抗gp96抗体的初步筛选[D]. 马小兵.天津医科大学2006
- [10].SARS病毒S蛋白特异性单克隆抗体制备和抗原识别位点鉴定[D]. 张小萍.第三军医大学2005