人胚胎干细胞和兔胚胎干细胞的建系与鉴定

论文题目: 人胚胎干细胞和兔胚胎干细胞的建系与鉴定

论文类型: 博士论文

论文专业: 细胞生物学

作者: 方贞付

导师: 盛慧珍

关键词: 囊胚,内细胞团,人胚胎干细胞

文献来源: 中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）

发表年度: 2005

论文摘要: 本实验室利用临床多余的囊胚进行人胚胎干细胞(human embryonic stem cells, hES)建系研究,首先用链蛋白酶消化以去除囊胚的透明带,然后直接机械分离出内细胞团,接种到饲养细胞层(feeders)上,在hES 细胞培养液中进行培养。一共成功建立了7 个hES 细胞系,其中6 个细胞系来自体外受精(in vitro fertilization, IVF)囊胚,分别命名为SH4、SH28、SH35、SH38、SH39 和SH42;1 个细胞系来自卵胞浆内单精注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)产生的囊胚,命名为ICSI-ES。根据hES 细胞系的公认的鉴定标准,我们对这些新建立的细胞系各项特征进行了检测。这些hES 细胞在体外能长期稳定增殖,表达碱性磷酸酶活性,表达hES 细胞特异的标志物Oct-4、TDGF、Sox2、LeftyA、Thy-1、FGF4、Rex1、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81。除了SH28 和ICSI-ES(ICSI-ES 体外分化能力待测)外,其他5 株在体外能形成包含三个胚层来源分化细胞的类胚体(embryoid body, EB)。除了SH4、SH28 和ICSI-ES(ICSI-ES 体内分化能力待测)外,其他5 株在免疫缺陷鼠体内能形成包含三胚层来源组织的畸胎瘤。其中SH35经过单细胞克隆化,产生一个hES 细胞亚系(SH35a),仍保持hES 细胞的各项特征,具有与SH35 细胞相同的生长形状,体外分化能形成类胚体,体内分化能在免疫缺陷鼠体内能形成包含三胚层来源组织的畸胎瘤。这些细胞系的群体倍增时间在30-39 小时之间,到目前为止,这些细胞系在体外已经分别培养420、390、345、335、335、335、180 天,培养代数达75、70、60、60、60、60、30。经过长期的培养仍保持正常的核型(SH4, SH28, SH35, SH38 和ICSI-ES 为46, XX;SH39 和SH42 为46, XY)。

论文目录:

缩略词表

第一部分人胚胎干细胞的建系与鉴定

中文摘要

英文摘要

第一章从IVF 多余囊胚建立人胚胎干细胞系

第二章从IVF 囊胚建立的人胚胎干细胞系的特征鉴定

第一节 hES 细胞Ⅱ类特征标志免疫组化染色及碱性磷酸酶活性染色

第二节 hES细胞I类特征标志的RT-PCR鉴定

第三节核型分析

第四节群体倍增时间及克隆形成率的计算

第五节体外分化

第六节体内分化

第七节 HLA 配型分析

第三章从ICSI 囊胚建立人胚胎干细胞系及其特征鉴定

第二部分兔胚胎干细胞的建系与鉴定

中文摘要

英文摘要

第一章从正常受精囊胚建立兔胚胎干细胞系及其特征鉴定

第一节利用正常受精囊胚建立兔胚胎干细胞系

第二节 rES 细胞Ⅱ类特征标志免疫组化染色及碱性磷酸酶活性染色

第三节 rES 细胞 I 类特征标志的RT-PCR 鉴定

第四节核型分析

第五节体外分化

第六节体内分化

第二章从孤雌激活的兔囊胚建立胚胎干细胞系及其特征鉴定

第三章从成体细胞核移植产生的兔囊胚建立胚胎干细胞系及其特征鉴定

发表和待发表的文章

致谢

发布时间: 2005-09-09

参考文献

[1].单层贴壁法诱导人胚胎干细胞向平滑肌细胞分化及其机制初探[D]. 黄华荣.浙江大学2006
[2].人胚胎干细胞（hESCs）的生长与分化调控[D]. 罗春花.重庆大学2016
[3].不同饲养层对人胚胎干细胞分化为多巴胺能神经元的影响[D]. 赵振强.南方医科大学2017
[4].诱导人胚胎干细胞向胰腺内分泌细胞分化及其机制研究[D]. 刘晓芳.中国人民解放军医学院2013
[5].多孔矿化水凝胶材料诱导人胚胎干细胞成骨分化的研究[D]. 文采.东南大学2015
[6].利用CRISPR/Cas9技术构建C3基因敲除猪模型和稳定表达红色荧光蛋白的人胚胎干细胞系的建立[D]. 张纬.南京医科大学2017

人胚胎干细胞和兔胚胎干细胞的建系与鉴定

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