海参养殖水体病原微生物生物治理技术研究

论文摘要

近年来,随着海参养殖规模不断扩大,养殖海参的细菌性病害已成为海参养殖业面临的最为突出和亟待解决的问题。目前,使用抗生素是抑制海参细菌性病害的有效方法,但是抗生素药物的大量使用带来的不良影响日益严重。蛭弧菌(Bdellovibrio)对革兰氏阴性细菌具有特异且广泛的裂解能力,从而杀灭致病细菌微生物、净化水体。蛭弧菌在水产养殖业中的应用研究日益受到重视,蛭弧菌作为微生态制剂有着无毒害,无副作用,效果稳定等特点。利用蛭弧菌取代抗生素、控制病原菌,显示了巨大的市场需求。分离鉴定海水养殖水体的致病微生物,考察蛭弧菌对宿主的裂解及裂解条件,对于海参等海珍品养殖水体净化,具有重要的理论意义和价值。本文从8个样品中分离细菌57株,观察镜下形态,并进行了革兰氏染色鉴定对部分菌株进行了16s rDNA测序,经序列比对表明,它们分别为柴油食烷菌(Alcanivorax dieselolei):Alcanivorax sp.C13、Alcanivorax dieselolei H34、(?)段单胞菌属(Pseudomonas sp): Pseudomonas marincola H36、Pseudomonas marincola H37.海洋屈挠杆菌(Tenacibaculum sp.):Tenacibaculum sp. B4、希瓦氏菌(Shewanella baltica):Shewanella baltica S55,迪茨氏菌(Dietzia natronolimnaea): Dietzia natronolimnaea Hong、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus): Bacillus cereus B7、 Bacillus cereus B8。最大相似性(98%以上)。其中海洋屈挠杆菌、希瓦氏菌与假单胞菌经查阅文献证实与海参表皮腐烂病相关,系海参养殖致病微生物。考察了蛭弧菌BdeD23对部分海参养殖水体中分离细菌的裂解；考察了不同温度、培养条件,分别为静止培养(分别在30℃和37℃下)、摇床培养(分别在30℃和37℃下),BdeD23对E.coli JM109裂解效果。以37℃摇床培养方式OD600值下降最大,即蛭弧菌对于宿主菌的裂解效果最明显。本文还考察了BdeD23在不同NaCl浓度下对E.coli JM109的裂解,NaCl浓度在低于0.5%或高于3%的情况下均无法形成溶菌斑,在1%NaCl下,出斑耗时最短(63h),溶菌斑扩展速度最快。本研究对海参养殖微生物病害的蛭弧菌杀灭技术进行了初步探索,证实了蛭弧菌对于海参养殖病害微生物的裂解作用,同时确定了蛭弧菌裂解宿主菌的限制因素及水平。对蛭弧菌作为新型微生态制剂应用于海参养殖微生物病害防治提供了理论基础,具有现实的指导意义。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 绪论
• 1.1 海水养殖水体致病微生物及其杀灭方法
• 1.1.1 海水养殖水体致病微生物
• 1.1.2 海水养殖水体致病微生物杀灭技术
• 1.2 海参养殖致病微生物及其杀火方法
• 1.2.1 海参养殖致病微生物
• 1.2.2 海参养殖致病微生物杀灭技术
• 1.3 蛭弧菌在海参养殖水体病原微生物生物治理中的应用
• 1.3.1 蛭弧菌的简介
• 1.3.2 蛭弧菌研究现状
• 1.3.3 蛭弧菌裂解宿主条件优化
• 1.3.4 蛭弧菌在海参养殖水体微生物污染治理中的应用
• 1.4 本论文的目的、内容及意义
• 第2章 海参养殖水体微生物的分离、筛选、鉴定
• 2.1 实验材料和仪器
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 微生物的分离与纯化
• 2.2.2 革兰氏染色及镜下观察
• 2.2.3 16s rDNA鉴定方法
• 2.2.4 BLAST序列比对
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 微生物分离及形态观察
• 2.3.2 分离菌株鉴定16s rDNA
• 2.3.3 测序结果及BLAST比对结果
• 第3章 蛭弧菌BdeD23对海参养殖水体细菌裂解
• 3.1 实验材料和仪器
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 实验仪器
• 3.2 实验方法
• 3.3 实验结果
• 第4章 蛭弧菌裂解宿主菌条件优化
• 4.1 实验材料和仪器
• 4.1.1 实验材料
• 4.1.2 实验仪器
• 4.2 实验方法
• 4.3 实验结果
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 研究生履历