白藜芦醇对CIA大鼠成纤维样滑膜细胞Caspase-8、FLIP表达的影响

论文摘要

类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA）是一种以慢性、对称性多关节炎为主要表现的自身免疫性疾病。其主要病理特征为滑膜细胞增生、血管翳形成、单个核细胞浸润、进而软骨侵蚀和关节破坏。RA的病因尚未明确,但多数研究认为,成纤维样滑膜细胞的类肿瘤样生长及其所分泌的大量促炎性细胞因子、趋化因子和金属蛋白酶,是导致关节内炎性细胞聚集、滑膜细胞增生和向周围组织侵蚀及基质降解和破坏的主要因素。因此,调控成纤维样滑膜细胞的增生和活化,将有利于控制RA的发生和发展。然而,由于病因不明确、发病机制不清楚,尽管目前有多种治疗药物和手段,但均不能有效根治或明显抑制病情进展。白藜芦醇（resveratrol, Res）是一类主要存在于葡萄皮和葡萄籽中的多酚类化合物,具有多种生物学活性,如抗菌消炎、抗氧化、诱发细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡、抑制新生血管形成、免疫调节和抗肿瘤等,并且毒副作用小,分布广泛,提取工艺成熟,因此拥有很高的药用价值和市场前景,近年来深受国内外医学界的重视。研究证实白藜芦醇可以抑制多种肿瘤细胞的生长增殖,成纤维样滑膜细胞具有类似肿瘤的增生特点,因此,我们推测Res可能通过类似机制抑制RA成纤维样滑膜细胞的生长。我们通过以下实验对其进行了研究。目的:探讨来自植物中的天然活性成分白藜芦醇对胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis, CIA）大鼠成纤维样滑膜细胞Caspase-8、FLIP表达的影响,并分析其浓度与时间作用的关系。方法:实验采用牛Ⅱ型胶原皮下多点注射的方法建立胶原诱导性关节炎（CIA）模型。将Wistar大鼠随机分为两组:正常对照组（Control组）和模型组（CIA组）。模型组用Ⅱ型胶原醋酸溶液与弗氏不完全佐剂的乳化液沿大鼠背部脊柱中线附近皮肤及鼠尾周围皮肤做多点皮下注射,21天后做腹腔激发注射,对照组注射等量的生理盐水。观察关节红肿程度、皮温、皮下结节、红斑等情况,并进行关节临床评分。28天后处死,取膝关节滑膜组织。将切取的滑膜组织经清洗、剪碎、消化、离心、培养、传代,获得第35代细胞,倒置显微镜观察滑膜细胞生长过程中的形态变化。采用Western Blot法检测不同浓度的白藜芦醇（50、100、200、400μmol/L）分别处理CIA大鼠成纤维样滑膜细胞24、48小时后Caspase-8、FLIP表达的变化,实验结果经自动图像分析系统进行半定量分析。采用SPSS 13.0统计学软件进行数据的统计分析。结果:1.大部分大鼠在胶原致敏后23周发病,主要表现为关节红肿,活动受限等。2.原代培养的CIA大鼠滑膜细胞镜下一般可分为两种类型,即巨噬细胞样滑膜细胞和成纤维样滑膜细胞;传代两次以上的滑膜细胞性状稳定、生长旺盛,细胞形态以成纤维样滑膜细胞为主,本研究即以培养的第35代滑膜细胞为实验对象。3.本实验通过采用不同浓度的Res（50、100、200、400μmol/L）处理体外分离培养的第35代CIA大鼠成纤维样滑膜细胞,并分别作用24、48小时,Western Blot结果显示:细胞对照组与白藜芦醇处理组中均检测出酶原形式（55KD）和活化形式（20KD）的Caspase-8;而白藜芦醇处理组酶原形式（55KD）和活化形式（20KD）的Caspase-8的水平均升高,并且随着浓度的递增,其表达逐渐增强;在24、48小时内其表达随时间延长而增加。4. Western Blot结果显示:白藜芦醇处理组FLIP的表达减少且随着Res处理浓度的递增而逐渐下降;在24、48小时内FLIP的表达随时间延长而降低。5.通过相关分析表明FLIP表达与Caspase-8表达呈明显的负相关。结论:1.白藜芦醇可上调Caspase-8在CIA大鼠成纤维样滑膜细胞中的表达且具有浓度依赖性;2.白藜芦醇可下调FLIP在CIA大鼠成纤维样滑膜细胞中的表达且具有浓度依赖性;3.白藜芦醇可通过FLIP的表达下降使Caspase-8表达增高。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述一 类风湿性关节炎滑膜细胞凋亡的机制
• 参考文献
• 综述二 核转录因子NF-κB 与类风湿性关节炎关系的研究进展
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历