维胃方对乙酸致大鼠胃溃疡的治疗作用及与血浆NT相关性研究

论文摘要

课题背景:消化性溃疡病是消化系统中常见的疾病,呈世界性分布,约有5%～10%的人一生中患过此病,其发病机制较为复杂,多为胃、十二指肠黏膜攻击因子和黏膜自身防御-修复因子之间失衡所致。其临床特点为病程长,易复发,且常伴发一些严重的并发症。临床治疗GU主要采用抑制胃酸和胃黏膜保护剂。目前H2受体阻滞剂及质子泵抑制剂在临床上广泛应用,这两种药物的使用,使GU的愈合率显著提高,但由于费用、副作用、耐药性、患者依从性等问题的存在,最终使该病的复发率仍居高不下。因此,研究GU理想的治疗方案仍是一件急迫而重要的任务,近几年来人们对于GU药物的开发,常从天然药物寻找突破口。维胃方是导师的经验方,通过临床实践证明对GU有较好疗效,七及方是维胃方中的组成部分。本实验采用适合药物疗效观察的乙酸致大鼠GU模型,以中医药基础理论为指导,临床疗效为依据,通过GU的大体愈合情况、溃疡面积、GU周围黏膜病理组织切片光学显微镜下观察,从不同层次阐述维胃方治疗GU的效果。并检测胃液PH值、测定血清GaS、血浆NT水平,其中以整体性调节作为切入点,选用NT作为主要指标,旨在阐述维胃方治疗GU的相关机制,为维胃方的临床运用和开发提供实验依据。实验方法:1、制备冰醋酸致大鼠GU模型参照Takagi等乙酸致大鼠GU造模方法,并加以改造。大鼠造模前24h,禁食不禁水。经腹腔注射10%水合氯醛溶液,按3.5ml/kg注射麻醉大鼠。腹部剃毛、消毒,于剑突下腹中线打开腹腔,手术切口长约2cm,暴露出胃,在胃前壁浆膜面接近窦体交界处的胃窦同一部分（避开血管）用浸有100%乙酸,直径为5mm的圆形滤纸接触60s,然后还纳胃体,逐层缝合切口,酒精消毒,保护切口。2、实验动物分组和相关指标检测雄性SPF级Wistar大鼠72只,根据完全随机法分为9组,每组8只:A正常组,系非造模大鼠,自由饮水,进食。B模型组,乙酸致大鼠GU,自由饮水,进食。C自愈组,乙酸致大鼠GU,自由饮水,进食。D雷尼替丁组,乙酸致大鼠GU,第4天开始灌胃雷尼替丁水悬液2ml,共7天,每天1次。E1维胃方低剂量组,乙酸致大鼠GU,第4天灌胃低剂量维胃方2ml,共7天,每天1次;E2维胃方中剂量组,乙酸致大鼠GU,第4天开始灌胃中剂量维胃方2ml,共7天,每天1次;E3维胃方高剂量组,乙酸致大鼠GU,第4天,灌胃高剂量维胃方2ml,共7天,每天1次。F1七及方中剂量组,乙酸致大鼠GU,第4天开始灌胃中剂量七及方2ml,共7天,每天1次;F2七及方高剂量组,乙酸致大鼠胃溃疡,第4天,灌胃高剂量七及方2ml,共7天,每天1次。除模型组在第4天,其余各组均在第11天麻醉后取材,并观察胃溃疡的大体愈合情况,检测胃液PH值、溃疡面积,光学显微镜下观察胃溃疡周围黏膜病理组织切片,测定血清Gas、血浆NT水平。统计学处理:实验数据用SPSS11.5统计软件分析,数据以χ±S表示,采用单因素方差分析方法（One-Way-ANOVA）进行多样本均数比较。大鼠溃疡面积的比较,方差不齐,采用Welch检验,各组间存在差异,采用Dunnett’s T3法检验;大鼠胃液pH值的比较,方差齐,各组间存在差异,采用LSD检验;大鼠血清Gas水平的比较,方差齐,但各组差别无统计学意义,无需做两两比较;大鼠血浆NT水平的比较,方差不齐,采用Welch检验,各组间存在差异,采用Dunnett’s T3检验。主要结果:1、胃黏膜大体标本肉眼观察维胃方中剂量组溃疡绝大部分愈合,新生组织与周围正常组织无明显差别,仅见个别小溃疡,且溃疡表浅,个别可见炎症分泌物。2、用药组与自愈组大鼠GU面积比较方差不齐,用Welch检验,各组间存在差异,采用Dunnett’s T3法检验。雷尼替丁组,维胃方低、中、高剂量组,七及方中、高剂量组与自愈组比较差别有统计学意义（P=0.005,P=0.028,P=0.001,P=0.007,P=0.001,P=0.001）。维胃方中剂量组与雷尼替丁组相比差别有统计学意义（P=0.013）。维胃方中剂量组、七及中剂量组、七及高剂量组与维胃方高剂量组相比差别有统计学意义（P=0.006,P=0.043,P=0.036）。维胃方对溃疡面积大小的影响并不成量效依赖。3、光学显微镜下观察胃黏膜病理组织切片维胃方中剂量组黏膜基本完整,仅有极个别溃疡深及上皮与胃腺区交界处,面积小,上皮细胞形态,腺体结构良好,腺体细胞增生数量较多,腺体间隙较小,排列较整齐,黏膜下层仅见少量炎症细胞浸润,黏膜下微循环未见明显病理改变,肌层变薄,肉芽组织增生,排列较整齐,小部分浆膜断裂。4、大鼠胃液PH值的比较方差齐,各组间存在差异,采用LSD检验,模型组、七及方中剂量组、七及方高剂量组与正常组比较差别有统计学意义（P=0.006,P=0.000,P=O.034）。维胃方中剂量组与正常组比较差别无统计学意义（P=0.746）。各组可以分为三个水平:pH值处于较低水平的是正常组、雷尼替丁组、维胃方各组,pH值处于中等水平的是自愈组,pH处于较高水平的是模型组、七及方各组。5、大鼠血清GAS水平的比较方差齐,但各组差别无统计学意义,无需做两两比较。6、大鼠血浆NT水平的比较方差不齐,采用Welch检验,各组间存在差异,采用Dunnett’s T3检验,模型组、雷尼替丁组、维胃方低剂量组、七及方中剂量组与自愈组相比差别有统计学意义（P=0.021,P=0.020,P=0.032,P=0.016）。自愈组、维胃方高剂量组与模型组相比差别有统计学意义（P=0.021,P=0.003）。各组与正常组相比差别均无统计学意义（均P>0.05）,其中维胃方中剂量组接近正常组（P=1）。各组大体可以分为三个层次:NT值处于较低水平的是模型组、雷尼替丁组、维胃方低剂量组、七及方中剂量组,NT值处于中等水平的是正常组、维胃方中剂量组、七及方高剂量组,NT值处于较高水平的是自愈组、维胃方高剂量组。维胃方对血浆NT水平的影响呈量效正相关（r=1,P=0.002）。结论:1、从溃疡面积中看,造模成功率高达到100%,自愈组大鼠对GU的自愈效果差,用药组起到一定治疗作用,维胃方中剂量组的疗效最佳。2、维胃方和七及方由于配伍及剂量的关系出现了复杂的量效关系,说明在相同煎煮等技术条件下,中药配伍、剂量对疗效影响极为重要。3、从胃黏模大体标本观察中发现,在用药各组中维胃方中剂量组效果最好。4、光学显微高倍镜下观察胃黏膜病理组织切片,维胃方中剂量组效果最佳,部分机制是通过改善微循环、抗炎和细胞再生这些方面发挥作用。5、模型组血浆NT水平低于正常组,说明溃疡形成时,体内合成和释放NT明显减少。6、模型组胃液pH值高于正常组,表明手术造模对动物本身就是一种应激,为防止乙酸的损害作用,大鼠机体应激性的调动体内的平衡机制,迅速中和酸性,以保护其受损伤的胃黏膜,这可能是模型组胃液pH值升高的原因。7、维胃方各剂量组血浆NT存在一种剂量依赖的正相关关系（r=1,P=0.002）,但是血清Gas并不成量效依赖关系,说明在脱离乙酸致大鼠GU的手术应激后的治疗过程中,推测NT对胃黏膜的影响不是直接通过G细胞分泌Gas而发挥作用,很可能是通过合成生长抑素等。8、根据pH的统计结果,七及方各组pH值高于维胃方各组,说明三七、白及二者单独合用,在提高pH值,抗胃酸方面能够起着重要作用。七及方中剂量组和维胃方低剂量组NT处于同等水平,但低于正常水平时,七及方中剂量组因为pH值高于维胃方低剂量组,所以能够发挥更好的疗效。9、维胃方中剂量组在胃液pH值、血清Gas、血浆NT水平均接近正常组,从GU病理组织切片上看,维胃方中剂量组修复受损胃黏膜效果更强,部分机制可能是通过NT的神经机制,从抗炎、改善微循环、细胞再生等方面,对机体起着整体性调节,发挥其整体治疗GU的作用。10、维胃方中剂量组血浆NT水平接近正常组（P=1）,推测血浆NT发挥其生理学效应,修复和保护胃黏膜存在一定阈值,生理浓度或接近生理浓度的血浆NT,对胃黏膜有更重要的意义,能调节机体尽可能达到常态。综上实验结果表明:通过GU的大体愈合情况、溃疡面积以及GU周围黏膜病理组织切片光学显微镜下观察,发现维胃方中剂量组的疗效最佳,其相关机制可能是通过NT,直接或间接使胃液pH值接近正常水平,并从抗炎、改善微循环、细胞再生等方面,对机体起着整体性调节,发挥其整体治疗GU的作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 一、中医对GU的认识
• 二、GU的研究进展
• 三、GU造模方法概况
• 四、GU的中西医治疗概况
• 五、本课题的研究思路和意义
• 第一章 维胃方、七及方治疗乙酸致大鼠胃溃疡后对其胃黏膜大体标本、溃疡面积的影响
• 1.1 材料与方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 第二章 维胃方、七及方治疗乙酸致大鼠胃溃疡后对其病理组织的影响
• 1.1 材料与方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 第三章 维胃方、七及方治疗乙酸致大鼠胃溃疡神经降压素及相关因素的实验研究
• 1.1 材料与方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间成果
• 致谢
• 研究生毕业论文统计学审稿证明