长春碱纳米粒对大鼠C6脑神经胶质瘤的抑制作用研究

论文摘要

目的:制备硫酸长春碱聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒（VBL-PBCA-NP）,对该纳米粒进行质量检测,研究该纳米粒对大鼠C6脑神经胶质瘤细胞的抑制作用,并对该纳米粒进行安全性检测。方法:①乳化聚合法制备VBL-PBCA-NP,透射电子显微镜观察其形态特征,马尔文粒度分析仪测定粒径及分布,紫外分光光度计法检测其包封率及载药量。②利用MTT法及生长曲线法对比测定VBL-PBCA-NP及VBL对大鼠C6脑神经胶质瘤细胞增殖抑制作用;利用克隆形成实验测定该纳米粒对单个细胞克隆形成能力的影响;通过HE染色及扫描电子显微镜分别观察VBL-PBCA-NP对细胞形态及细胞表面超显微结构的影响,并与VBL进行比较。通过流式细胞仪检测VBL-PBCA-NP及VBL对细胞周期及凋亡的影响。③MTT法比较检测VBL-PBCA-NP及VBL对原代培养星形胶质细胞的毒性;通过溶血性试验及急性毒性试验对该纳米粒进行安全性检测。结果:①制备的VBL-PBCA-NP平均粒径是74.4nm,包封率为78.47%,载药量为39.23%,纳米粒分布均匀,无粘连,粒径分布范围较窄。②MTT结果表明:VBL浓度在0.55000μg/L范围内,VBL-PBCA-NP能明显抑制大鼠C6脑神经胶质瘤细胞的生长增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。在相同的VBL浓度及培养条件下,VBL-PBCA-NP比VBL具有更强的抗肿瘤作用。VBL-PBCA-NP能显著抑制大鼠C6脑神经胶质瘤细胞的生长,与VBL组相比,VBL-PBCA-NP组的增长抑制率显著提高（P<0.05）。流式细胞仪检测结果显示,VBL-PBCA-NP组的诱导凋亡作用明显强于VBL组,细胞大量停留在G2期,细胞分裂受阻。而克隆形成实验也表明:VBL-PBCA-NP作用后的神经胶质瘤细胞的分裂增值能力显著低于VBL组（P<0.05）。HE染色显示,同样的药物浓度作用下,VBL-PBCA-NP组更容易引起细胞数量减少,凋亡明显。扫描电子显微镜观察结果显示:VBL-PBCA-NP及VBL组均能引起大鼠C6神经胶质瘤细胞胞膜内折,形成凋亡小体。③VBL-PBCA-NP的半数致死量是26.377mg/Kg,95%的可信限=21.868-33.249mg/Kg。VBL的半数致死量是22.7 mg/Kg,95%的可信限=18.815-27.762mg/Kg。MTT实验显示,VBL-PBCA-NP比VBL对大鼠星形胶质细胞有着较低的细胞毒性作用,能够有效缓和长春碱药物注射造成的体重减轻及器官衰竭现象。结论:制备得到的VBL-PBCA-NP粒径分布均匀,无粘连,符合纳米药物的粒径标准。得到的纳米粒制剂比VBL对大鼠C6脑神经胶质瘤细胞有显著的增殖抑制性,影响细胞周期并引发细胞膜内折,形成凋亡小体。对原代培养的星形胶质细胞毒性较小,在急性毒性实验中也显示出较低的全身毒性。在特异靶向治疗肿瘤方面有很好的应用前景。该纳米粒不存在溶血性,可以作为静脉注射剂进行临床使用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 脑肿瘤治疗现状
• 1.1.1 血脑屏障
• 1.1.2 多药耐药
• 1.1.3 肿瘤干细胞
• 1.2 纳米技术研究进展
• 1.2.1 纳米载体协助药物通过血脑屏障研究进展
• 1.2.2 纳米技术逆转肿瘤细胞多药耐药研究进展
• 1.3 纳米技术治疗肿瘤的其他优势
• 1.3.1 提高药物的稳定性
• 1.3.2 提高肿瘤细胞对药物的摄取
• 1.3.3 NP 技术与热疗、核素内照射等结合提高抗肿瘤效果
• 1.4 纳米粒的制备方法研究
• 1.4.1 乳化聚合法
• 1.4.2 天然高分子凝聚法
• 1.4.3 液中干燥法
• 1.4.4 盐析法
• 1.4.5 溶剂置换法和界面沉淀法
• 1.4.6 天然大分子物质去溶剂技术
• 1.4.7 界面聚合法
• 1.4.8 复相乳液溶剂挥发法
• 1.4.9 超临界流体技术
• 参考文献
• 第二章 硫酸长春碱聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的制备及质量评价
• 2.1 材料及方法
• 2.1.1 材料及仪器
• 2.1.2 实验方法
• 2.1.3 统计分析
• 2.2 结果
• 2.2.1 制备方法对VBL-PBCA-NP 粒径分布及药物含量的影响
• 2.3 讨论
• 第三章 长春碱纳米粒对大鼠C6 脑神经胶质瘤增殖及凋亡的影响
• 3.1 材料及方法
• 3.1.1 材料及仪器
• 3.1.2 实验方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 倒置显微镜观察大鼠C6 脑神经胶质瘤细胞生长情况
• 3.2.2 VBL-PBCA-NP 对大鼠C6 脑胶质瘤细胞生长曲线的影响
• 3.2.3 MTT 法检测VBL-PBCA-NP 对大鼠C6 脑胶质瘤细胞增殖的影响
• 3.2.4 克隆形成实验检测VBL-PBCA-NP 对大鼠C6 脑神经胶质瘤单个细胞增值能力的影响
• 3.2.5 流式细胞术检测VBL-PBCA-NP 对大鼠C6 脑胶质瘤细胞周期及凋亡的影响
• 3.2.6 HE 染色观察VBL-PBCA-NP 对大鼠C6 脑神经胶质瘤细胞形态的影响
• 3.2.7 扫描电镜观察VBL-PBCA-NP 对大鼠C6 脑神经胶质瘤细胞形态的影响
• 3.3 讨论
• 第四章 VBL-PBCA-NP 的安全性实验
• 4.1 材料及方法
• 4.1.1 实验材料及仪器
• 4.1.2 实验方法
• 4.1.3 统计分析
• 4.2 结果
• 4.2.1 星形胶质细胞形态特点
• 4.2.2 MTT 法检测VBL-PBCA-NP 对大鼠星形胶质细胞的生长抑制作用
• 4.2.3 溶血性实验
• 4.2.4 急性毒性实验测定VBL-PBCA-NP 的半数致死量
• 4.2.5 小鼠体重变化结果
• 4.3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 英文缩略语
• 致谢
• 作者简介