枇杷叶中科罗索酸的资源化学调查及提取分离技术研究

论文摘要

枇杷叶是我国一种传统中药植物资源,枇杷叶中三萜酸是具有广泛生物活性的一类物质,其中科罗索酸具有治疗Ⅱ型糖尿病、减肥、降血压等药理功能,被称为植物胰岛素,近几年来成为研究的热点。为了开发和利用枇杷叶中的科罗索酸,本文首先建立了科罗索酸的定性定量分析方法,并结合溶剂萃取、脱色和柱分离等技术和方法,调查了枇杷叶中科罗索酸的资源化学,确定了枇杷叶中高含量科罗索酸的最佳提取工艺,分离纯化得到了不同纯度的科罗索酸产品。本研究的主要结果如下:1、建立了科罗索酸的TLC定性分析法和RP-HPLC定量分析法。通过对展开剂和显色剂的筛选,最后确定TLC定性分析法CHCl3:CH3OH（V1:V2）为96:4-95:5,显色剂为10%的硫酸乙醇溶液。通过对流动相比例的调整,确定流动相为乙腈-水的体积比为88:12,等梯度洗脱,检测波长为210 nm,流速是0.8 mL/min,柱温35℃,运行时间35 mins,保留时间为9.424 min左右。2、系统调查了枇杷叶中科罗索酸含量的分布规律。通过以枇杷植物体的不同部位,福建莆阳的不同嫩度、不同品种的枇杷叶,我国7个不同省份生产的枇杷叶,湖南浏阳的不同采摘时期、不同贮藏时期、不同前处理的枇杷叶为原料,采用RP-HPLC法,系统调查了枇杷叶中科罗索酸含量的变化情况。结果表明:科罗索酸含量在枇杷植物体内的分布情况为叶>果肉>花>茎>根>树皮;在福建莆田溪南基地不同嫩度枇杷叶中的含量变化规律是落叶>成熟叶>中等成熟叶>嫩叶,不同品种的枇杷叶中科罗索酸的含量以早钟6号最高;不同省份枇杷叶中科罗索酸的含量以重庆北碚最高:在湖南浏阳的一年中不同采摘时期的枇杷叶中科罗索酸含量以4月份最高,枇杷叶中科罗索酸随着贮藏期延长逐渐增加,在不同前处理的枇杷叶中科罗索酸的含量则是刷毛的处理高于不刷毛的处理。3、确定了枇杷叶中科罗索酸提取的最佳工艺。以福建莆田溪南枇杷基地的枇杷叶为原料,通过设计单因素实验和正交实验,并采用RP-HPLC法确定了两种的最佳提取工艺。其中溶剂萃取法的最佳提取工艺是溶剂为95%乙醇浓度、提取时间2 h、提取温度70℃、料液比1:20 g/mL,在该条件下所得产品中科罗索酸的含量为4.74%:超声辅助法的最佳提取工艺是溶剂为95%乙醇浓度,料液比1:20 g/mL,提取时间20 mins,温度40℃,在该条件下所得产品中科罗索酸的含量为4.81%。4、分离纯化得到了不同规格的科罗索酸产品。以枇杷叶乙醇提取物为原料,采用水洗、活性炭脱色、石油醚脱色、硅胶柱色谱等技术和手段,分离纯化得到了科罗索酸含量分别为26.30%,47.86%,82.52%等不同规格的样品。本文较系统地建立了科罗索酸的分析检测方法,调查了枇杷叶中科罗索酸的资源,确定了两种提取方法的最佳工艺,分离纯化得到了不同规格的科罗索酸产品,为系统、全面、合理的开发和利用枇杷叶中的科罗索酸提供了科学依据,具有一定的实际应用前景。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩写词（Abbreviation）
• 第一章 绪论
• 1 枇杷叶
• 1.1 枇杷叶的来源
• 1.2 枇杷叶的鉴别
• 1.3 枇杷叶的产品开发
• 1.3.1 枇杷叶膏
• 1.3.2 枇杷露
• 1.3.3 枇杷叶茶
• 2 三萜酸的国内外研究进展
• 2.1 三萜酸在枇杷叶中的类型
• 2.1.1 以熊果酸为母核的三萜类化合物
• 2.1.2 以齐墩果酸为母核的三萜类化合物
• 2.1.3 山香二烯酸
• 2.2 三萜酸的生物活性
• 2.2.1 减肥、降血糖、治疗糖尿病作用
• 2.2.2 抗肿瘤、抗癌作用
• 2.2.3 抗菌、抗病毒作用
• 2.2.4 抗溃疡作用
• 2.2.5 护肝作用
• 2.2.6 其他作用
• 2.3 枇杷叶三萜酸的提取、分离与纯化
• 2.4 三萜酸的检测分析与鉴定
• 2.4.1 薄层色谱法
• 2.4.2 高效液相色谱法
• 2.4.3 气相色谱法
• 2.4.4 毛细管电泳法
• 2.4.5 毛细管气相色谱法
• 2.4.6 气相色谱-质谱法
• 2.4.7 三萜酸的鉴定
• 3 研究目的与意义
• 4 主要研究内容
• 5 研究的技术路线
• 第二章 科罗索酸分析方法的建立
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 试剂与药品
• 1.3 仪器
• 1.4 方法
• 1.4.1 薄层定性分析法
• 1.4.2 反相高效液相色谱法
• 2 结果与分析
• 2.1 三种三萜酸薄层色谱分析
• 2.1.1 显色剂的确定
• 2.1.2 展开剂的确定
• 2.1.3 方法的稳定性
• 2.2 反相高效液相色谱法的结果与分析
• 2.2.1 标准曲线、线性范围及检出限
• 2.2.2 精密度试验
• 2.2.3 回收率试验
• 2.2.4 HPLC指纹图谱
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 枇杷叶中科罗索酸的资源化学调查
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 仪器
• 1.3 试剂
• 1.4 方法
• 1.4.1 水分检测
• 1.4.2 科罗索酸含量检测
• 2 结果与分析
• 2.1 枇杷不同部位中科罗索酸的含量分析
• 2.2 不同嫩度的枇杷叶中科罗索酸的含量分析
• 2.3 福建莆田溪南枇杷基地不同品种的枇杷叶中科罗索酸的含量分析
• 2.4 7个不同产地的的枇杷叶中科罗索酸的含量分析
• 2.5 不同采摘时期枇杷叶中科罗索酸的含量分析
• 2.6 不同前处理的枇杷叶中科罗索酸含量的比较
• 2.7 一年中不同贮藏时间的枇杷叶中科罗索酸的含量分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 枇杷叶中科罗索酸的提取工艺研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 药品与试剂
• 1.3 仪器
• 1.4 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 科罗索酸的提取工艺研究
• 2.1.1 溶剂种类对提取科罗索酸的影响
• 2.1.2 溶剂浓度对提取科罗索酸的影响
• 2.1.3 粉碎程度对提取科罗索酸的影响
• 2.1.4 提取次数对提取科罗索酸的影响
• 2.1.5 料液比对提取科罗索酸的影响
• 2.1.6 温度对提取科罗索酸的影响
• 2.1.7 时间对提取科罗索酸的影响
• 2.1.8 溶剂萃取法正交试验对科罗索酸的含量影响
• 2.1.9 超声辅助提取法试验对科罗索酸含量的影响
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 枇杷叶中科罗索酸的分离纯化技术研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 药品
• 1.4 方法
• 1.4.1 水洗方法
• 1.4.2 大孔树脂柱分离法
• 1.4.3 醇提水沉淀法
• 1.4.4 活性炭脱色法
• 1.4.5 石油醚脱色法
• 1.4.6 硅胶柱色谱法
• 1.4.7 检测分析方法
• 2 结果与分析
• 2.1 水洗后样品的科罗索酸分析
• 2.2 大孔树脂分离后样品的科罗索酸分析
• 2.2.1 水洗脱液样品的科罗索酸分析
• 2.2.2 25%乙醇脱液样品的科罗索酸分析
• 2.2.3 50%乙醇脱液样品的科罗索酸分析
• 2.2.4 75%乙醇脱液样品的科罗索酸分析
• 2.2.5 95%乙醇脱液样品的科罗索酸分析
• 2.3 醇提水沉淀法后样品的科罗索酸分析
• 2.4 活性炭脱色后样品的科罗索酸分析
• 2.5 石油醚脱色后样品的科罗索酸分析
• 2.6 硅胶柱色谱分离后样品的科罗索酸定性和定量分析
• 2.6.1 硅胶柱色谱后样品中科罗索酸的定性分析
• 2.6.2 硅胶柱色谱后样品中科罗索酸的定量分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 全文总结
• 1、本文主要研究结果
• 2、本文创新之处
• 3、展望
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介