茶多酚脂质体的制备及其代谢动力学研究

论文摘要

茶多酚（tea polyphenol, TP）,是茶叶中所含的一类多羟基酚类化合物的总称,是茶叶的主要有效成分,占茶叶干重20%～30%。茶多酚具有清除自由基、抗衰老、抗肿瘤、降血脂、抑菌、美容等多种药理功能和功效,但茶多酚脂溶性较差,生物利用度低,易被氧化,限制了其在医药和食品等行业的应用。脂质体作为药物载体,具有有效保护被包裹药物、防止药物氧化、提高药物稳定性、提高药物生物利用度、使被包裹药物具有靶向性、天然无毒、生物可降解、无免疫抑制作用等优点,但长久以来,脂质体大都应用于化妆品和医药领域,近年来才开始应用于食品中。液态的脂质体由于性质不稳定,易于发生凝聚、融合,并导致其包封的药物泄漏,难以以满足药物制剂稳定性的要求,应用受到了很大限制。冷冻干燥法是目前制备储存脂质体的最佳方法,解决了脂质体制备过程和储存中的物理稳定性和渗漏问题,并避免了不稳定药物的失活、分解。为提高茶多酚在体内的生物利用度,延长其作用时间,本研究以脂质体为载体,将茶多酚进行包覆,筛选了茶多酚脂质体的最佳制备方法,对其工艺技术参数和配方进行了优化；借助冷冻干燥技术制备冻干制剂,并对其进行表征；同时研究了茶多酚脂质体在大鼠体内的代谢动力学,进一步评价了其在体内的缓释性能、生物利用度以及作用时间。研究内容及结果如下：（1）确定了茶多酚脂质体的最佳制备方法——逆相蒸发法。即：精密称取卵磷脂（SPCphosphatidylcholine）和胆固醇（CH cholesterol）适量于梨形瓶中,加入氯仿,振摇,再加入一定量的磷酸盐缓冲茶多酚溶液,超声3-5min得乳浊液,30℃旋转至干成膜,加入磷酸盐缓冲溶液,使膜溶解并充分水合,即得茶多酚脂质体。（2）建立了制备茶多酚脂质体的配方数学回归模型,并确定了最佳工艺技术参数。逆相蒸发法制备茶多酚脂质体配方优化数学回归模型为：Y=49.87000-1.99125 X1+2.57458 X2+1.83208 X3-2.74656 X12-2.07781 X22-2.33531 X32-2.41281 X42+4.16313X1X3各因素对包封率影响作用大小顺序为：茶多酚浓度>SPC/CH>有机相／水相>磷酸盐缓冲液的摩尔浓度；逆相蒸发法制备茶多酚脂质体最佳配方：SPC/CH （W/W）为3：1,茶多酚浓度为7mg.mL-1,有机相／水相（V/V）为4：1,磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为15mM,在该配方下,数学回归模型预测的包封率为50.37%。（3）评价了茶多酚脂质体的特征及质量。结果表明,本研究所制备的茶多酚脂质体形态呈圆球形或椭球形,为大单室脂质体,有效粒径为165.3±2.3 nm,多分散系数为0.260,粒径分布均匀；Zeta电位为-69.3mV。体外缓释性能研究表明,茶多酚脂质体有良好的缓释效果。（4）筛选出了最佳冻干保护剂及最佳添加浓度,并评价了冻干茶多酚脂质体的质量。最佳冻干保护剂：蔗糖,最佳添加浓度：15%（W/V）。所制备的冻干茶多酚脂质体形态呈圆球形或椭球形,为大单室脂质体,有效粒径为170.4±3.7nm,多分散系数为0.207,粒径分布均匀；Zeta电位为-60.5mV,脂质体相当稳定；将其于4℃放置5个月,表观无变化,粒径和包封率基本也无明显变化,冻干茶多酚脂质体具有较长保存期。（5）建立了HPLC测定大鼠血浆中茶多酚的分析方法。即色谱条件为：色谱柱：AgilentHC-C18（4.6×250mm）；流动相：甲醇：水=80：20；流速1 mL/min;检测波长280nm；柱温25℃；进样量20μL。方法精密度RSD分别为7.77%、4.06%、1.46%（n=3）,平均回收率分别为：104.0%、104.7%、99.7%。（6）获得了茶多酚及茶多酚脂质体在大鼠体内的代谢动力学参数。研究表明茶多酚溶液和茶多酚脂质体在大鼠体内代谢属一室模型,其主要药代动力学参数：①Ke分别为0.249346h-1,0.196381 h-1；②T1/2（Ke）分别为2.779861h,3.529600h；③T（max）分别为2.454051h,3.649657h；④C（max）分别为0.461695μg/mL,0.603934μg/mL；⑤AUC分别为3.414293（μg/mL）*h,6.297362（μg/mL）*h：⑥CL/F（s）分别为1.206692mg/h/（μg/mL）,0.654242mg/h/（μg/mL）；V/F（c）分别为4.839429 mg/（μg/mL）,3.331491 mg/（μg/mL）；⑦MRT分别为7.408901h,9.782603h。结果表明,将茶多酚制备为脂质体,可以大大延长茶多酚在体内的作用时间,降低排泄速度,提高血药浓度,提高生物利用度,并具有较好的缓释作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第1章 文献综述
• 1.茶多酚（Tea Polyphenol）概述
• 1.1 茶叶概况
• 1.2 茶多酚组成及结构
• 1.3 茶多酚的生物学活性和药理作用
• 1.3.1 清除自由基和抗氧化
• 1.3.2 抗肿瘤和防癌
• 1.3.3 抗衰老
• 1.3.4 降血脂和抗动脉粥样硬化
• 1.3.5 降血糖和防治糖尿病
• 1.3.6 抑菌抗病毒
• 1.3.7 防辐射损伤
• 1.3.8 防龋和除口臭
• 1.3.9 减肥
• 1.3.10 其他功能
• 2.脂质体的研究进展
• 2.1 概述
• 2.2 脂质体的组成与结构
• 2.3 脂质体的分类
• 2.4 脂质体的作用特点
• 2.5 脂质体的作用机制
• 2.6 脂质体的制备方法
• 2.6.1 薄膜法
• 2.6.2 逆相蒸发法
• 2.6.3 注入法
• 2.6.4 冻融法
• 2.6.5 复乳法
• 2.6.6 pH梯度法
• 2.6.7 冷冻干燥法
• 2.6.8 其他方法
• 2.7 脂质体作为药物载体的应用
• 2.7.1 抗肿瘤药物的载体
• 2.7.2 抗寄生虫药物载体
• 2.7.3 抗菌药物的载体
• 2.7.4 多肽、酶载体
• 2.7.5 解毒剂的载体
• 2.7.6 作为免疫激活剂、抗肿瘤转移
• 2.7.7 基因治疗药物载体
• 2.7.8 天然活性成分的载体
• 2.8 脂质体的给药途径
• 2.8.1 静脉注射
• 2.8.2 肌肉注射和皮下注射
• 2.8.3 口服给药
• 2.8.4 眼内给药
• 2.8.5 肺部给药
• 2.8.6 皮肤给药
• 2.9 脂质体发展动态
• 2.9.1 温度敏感脂质体
• 2.9.2 pH敏感脂质体
• 2.9.3 光敏感脂质体
• 2.9.4 隐形脂质体（长循环脂质体）
• 2.9.5 前体脂质体
• 2.9.6 免疫脂质体
• 2.9.7 磁性脂质体
• 2.9.8 纳米脂质体
• 3.本课题研究的目的及意义
• 第2章 正文
• 1.引言
• 2.材料和方法
• 2.1 试验材料与主要试剂
• 2.2 主要仪器和设备
• 2.3 试验方法
• 2.3.1 包封率测定方法
• 2.3.1.1 茶多酚全波长扫描
• 2.3.1.2 空白脂质体全波长扫描
• 2.3.1.3 标准曲线的建立
• 2.3.1.4 茶多酚脂质体包封率的测定方法
• 2.3.2 茶多酚脂质体制备工艺研究
• 2.3.2.1 茶多酚脂质体制备方法的筛选
• 2.3.2.2 单因素考察茶多酚脂质体制备的处方和工艺
• 2.3.2.3 多因素交互作用试验设计
• 2.3.3 茶多酚脂质体的表征及质量评价
• 2.3.3.1 光学显微镜下观察实验
• 2.3.3.2 透射电子显微镜下观察实验
• 2.3.3.3 茶多酚脂质体粒度测定
• 2.3.3.4 茶多酚脂质体Zeta电位的测定
• 2.3.3.5 茶多酚脂质体外释放度研究
• 2.3.3.6 茶多酚脂质体稳定性的测定
• 2.3.4 冻干茶多酚脂质体的制备及质量评价
• 2.3.4.1 茶多酚冻干脂质体的制备
• 2.3.4.2 茶多酚脂质体包封率的测定方法
• 2.3.4.3 茶多酚冻干脂质体粒径测定
• 2.3.4.4 最佳冻干保护剂及最适添加浓度的选择
• 2.3.4.5 透射电子显微镜观察
• 2.3.4.6 茶多酚冻干脂质体Zeta电位的测定
• 2.3.4.7 茶多酚冻干脂质体稳定性的考察
• 2.3.5 茶多酚脂质体在大鼠体内代谢动力学研究
• 2.3.5.1 药品的配制
• 2.3.5.2 血浆样品的制备
• 2.3.5.3 血浆茶多酚分析方法的建立
• 2.3.5.4 大鼠体内代谢动力学
• 2.3.5.5 数据处理方法
• 3.结果与分析
• 3.1 包封率测定方法的建立
• 3.1.1 最大吸收波长的选择
• 3.1.2 茶多酚标准曲线的建立
• 3.2 茶多酚脂质体制备工艺及配方研究结果
• 3.2.1 茶多酚制备方法的选择
• 3.2.2 单因素考察制备茶多酚脂质体的配方和工艺
• 3.2.2.1 卵磷脂与胆固醇的质量比对包封率的影响
• 3.2.2.2 茶多酚浓度对包封率的影响
• 3.2.2.3 有机相与水相的体积比对包封率的影响
• 3.2.2.4 磷酸盐缓冲溶液的离子浓度对包封率的影响
• 3.2.3 逆相蒸发法制备茶多酚脂质体配方的优化
• 3.2.3.1 数学回归模型的建立及各因素影响结果
• 3.2.3.2 脂质体配方的优化
• 3.3 茶多酚脂质体的表征及质量评价
• 3.3.1 茶多酚脂质体外观
• 3.3.2 茶多酚脂质体形态、结构观察结果
• 3.3.3 茶多酚脂质体粒径分布结果
• 3.3.4 茶多酚脂质体Zeta电位测定结果
• 3.3.5 茶多酚脂质体的体外释放度
• 3.3.6 茶多酚脂质体稳定性测定结果
• 3.4 冻干茶多酚脂质体的制备及质量评价
• 3.4.1 最佳冻干保护剂及最适添加浓度
• 3.4.1.1 冻干前后茶多酚脂质体粒径大小的分布
• 3.4.1.2 冻干前后茶多酚脂质体的包封率测定结果
• 3.4.2 冻干茶多酚脂质体的质量评价
• 3.4.2.1 外观及再分散性
• 3.4.2.2 形态、结构观察结果
• 3.4.2.3 Zeta电位测定结果
• 3.4.2.4 稳定性考察结果
• 3.5 茶多酚脂质体在大鼠体内代谢动力学研究结果
• 3.5.1 分析方法的建立
• 3.5.1.1 方法专属性结果
• 3.5.1.2 标准曲线的绘制
• 3.5.1.3 精密度和回收率
• 3.5.2 代谢动力学测定结果
• 3.5.2.1 血药浓度测定结果
• 3.5.2.2 血药浓度-时间曲线
• 3.5.2.3 代谢动力学参数
• 4.讨论
• 4.1 关于脂质体包封率测定方法
• 4.2 关于脂质体制备
• 4.2.1 关于制备方法的选择
• 4.2.2 关于制备工艺
• 4.2.3 关于有机溶剂的选择
• 4.2.4 关于磷酸缓冲液pH的选择
• 4.3 关于脂质体冻干
• 4.3.1 关于冻干制剂的选择
• 4.3.2 关于冻干工艺条件的选择
• 4.4 关于茶多酚及其脂质体在大鼠体内的代谢动力学
• 第3章 结论
• 1.确定了茶多酚脂质体制备的最佳方法
• 2.建立了茶多酚脂质体配方数学回归模型并确定了最佳工艺技术参数
• 3.评价了茶多酚脂质体的特性及质量
• 4.筛选出了最佳冻干保护剂并评价了茶多酚冻干脂质体
• 5.建立了HPLC测定大鼠血浆中茶多酚浓度的分析方法
• 6.获得了茶多酚及茶多酚脂质体在大鼠体内的代谢动力学参数
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间研究成果