梓醇在老年性痴呆细胞模型中的应用研究

论文摘要

本研究采用原代细胞培养技术，以神经毒素β-淀粉样肽(Aβ1-42)诱导小鼠原代大脑皮层神经细胞损伤，构建老年性痴呆细胞模型，分析梓醇对老年性痴呆神经细胞的保护作用及其作用机制。利用Aβ1-42诱导小鼠原代大脑皮层纯神经元凋亡，探讨梓醇对小鼠大脑皮层神经元的保护作用机制。大脑皮层纯神经元细胞经梓醇预孵育30min再和Aβ1-42作用72h后，检测梓醇对皮层神经元形态变化、caspase级联通路以及线粒体功能的调节作用。检测结果显示梓醇改善了损伤的细胞形态，有效减少了乳酸脱氢酶（LDH）的释放，抑制了caspase-3及乙酰胆碱酯酶（AChE）活性的提高，减弱了细胞内钙离子超载、活性氧自由基（ROS）产生和线粒体膜电位的丧失，保护了线粒体功能免受损伤。这些结果表明，梓醇可能通过阻断caspase级联通路的激活，以及改善线粒体功能障碍而降低Aβ1-42对神经元产生的毒性损伤。利用Aβ1-42诱导小鼠原代大脑皮层神经-胶质混合细胞，造成皮层神经元炎症损伤，探讨梓醇的抗炎症保护作用机制。经梓醇和Aβ1-42药物处理后，考察了梓醇对大脑皮层神经元细胞形态损伤和细胞活性降低的保护作用，同时，在纯小胶质细胞和星型胶质细胞中，检测了梓醇对两种胶质细胞激活后形态改变及炎症因子产生的影响作用。结果表明梓醇有效改善了神经元和小胶质细胞的形态损伤，抑制了小胶质细胞的大量增殖，降低了ROS、TNF-α、NO、iNOS等炎症因子的过量表达以及LDH的释放。这些结果表明，在Aβ1-42损伤的小鼠大脑皮层神经-胶质混合细胞培养体系中，一方面，梓醇直接保护神经元，另一方面，梓醇通过抑胶质细胞激活及炎症因子的产生，间接保护神经元，提高细胞活性，从而发挥了抗炎症保护作用。以上结果表明，梓醇能够通过抗细胞凋亡和抗炎症作用抑制Aβ1-42对皮层神经元造成的毒性损伤。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 1 文献综述
• 1.1 老年性痴呆与细胞凋亡
• 1.1.1 细胞凋亡的特征
• 1.1.2 caspase及AChE在细胞凋亡过程中的作用
• 1.1.3 线粒体与细胞凋亡
• 1.2 胶质细胞的激活在AD形成过程中的作用
• 1.2.1 小胶质细胞和星型胶质细胞的特性
• 1.2.2 AD中神经胶质细胞激活的病理及对神经元细胞的损伤
• 1.3 老年性痴呆动物模型的研究进展
• 1.3.1 神经毒素Aβ在AD中毒性作用的发挥机制
• 1.3.2 几种常用的AD动物模型
• 1.4 针对老年性痴呆症的药物治疗现状
• 1.5 本论文的选题依据及研究内容
• 参考文献
• 2 梓醇对原代大脑皮层神经元细胞凋亡的保护作用研究
• 2.1 实验材料及设备
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 小鼠大脑皮层神经元细胞培养
• 2.2.2 免疫细胞化学染色
• 1-42对小鼠大脑皮层神经元细胞的损伤作用'>2.2.3 Aβ_1-42对小鼠大脑皮层神经元细胞的损伤作用
• 1-42介导小鼠大脑皮层神经元细胞损伤后LDH的释放'>2.2.4 Aβ_1-42介导小鼠大脑皮层神经元细胞损伤后LDH的释放
• 2.2.5 caspase-3活性分析
• 2.2.6 乙酰胆碱酯酶（ACHE）活性分析
• 2.2.7 细胞内钙离子的测定
• 2.2.8 细胞内活性氧自由基（ROS）的测定
• 2.2.9 细胞线粒体膜电位的测定
• 2.2.10 统计学分析
• 2.3 实验结果
• 1-42对大脑皮层神经元细胞活力的影响'>2.3.1 Aβ_1-42对大脑皮层神经元细胞活力的影响
• 1-42致大脑皮层神经元细胞内LDH漏出的影响'>2.3.2 梓醇对Aβ_1-42致大脑皮层神经元细胞内LDH漏出的影响
• 1-42介导的大脑皮层神经元细胞损伤的保护作用'>2.3.3 梓醇对Aβ_1-42介导的大脑皮层神经元细胞损伤的保护作用
• 1-42诱导皮层神经元凋亡时caspase-3和AChE活力的影响'>2.3.4 梓醇对Aβ_1-42诱导皮层神经元凋亡时caspase-3和AChE活力的影响
• 1-42介导的大脑皮层神经元细胞内Ca²⁺失衡'>2.3.5 梓醇调节了Aβ_1-42介导的大脑皮层神经元细胞内Ca²⁺失衡
• 1-42诱导的大脑皮层神经元细胞内ROS的产生'>2.3.6 梓醇抑制了Aβ_1-42诱导的大脑皮层神经元细胞内ROS的产生
• 1-42导致的大脑皮层神经元线粒体膜电位降低'>2.3.7 梓醇改善了Aβ_1-42导致的大脑皮层神经元线粒体膜电位降低
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 参考文献
• 1-42介导的大脑皮层神经元炎症损伤的保护作用研究'>3 梓醇对Aβ_1-42介导的大脑皮层神经元炎症损伤的保护作用研究
• 3.1 实验材料及设备
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 实验仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 小鼠原代大脑皮层神经-胶质细胞培养
• 3.2.2 纯小胶质细胞培养
• 3.2.3 纯星型胶质细胞培养
• 3.2.4 免疫染色
• 3.2.5 乳酸脱氢酶（LDH）的测定
• 3.2.6 小胶质细胞中活性氧自由基的测定
• 3.2.7 酶联免疫法检测小胶质细胞中肿瘤坏死因子（TNF-α）的释放
• 3.2.8 星型胶质细胞中一氧化氮的（nitric oxide,NO）的测定
• 3.2.9 星型胶质细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的测定
• 3.2.10 统计学分析
• 3.3 实验结果
• 1-42介导的神经元损伤的保护作用'>3.3.1 皮层神经-胶质细胞体系中梓醇对Aβ_1-42介导的神经元损伤的保护作用
• 1-42介导的小胶质细胞激活的抑制作用'>3.3.2 梓醇对Aβ_1-42介导的小胶质细胞激活的抑制作用
• 3.3.3 梓醇抑制激活的小胶质细胞产生炎症因子
• 3.3.4 梓醇抑制星型胶质细胞的激活
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 参考文献
• 结论
• 攻读硕士学位期间发表学术论文情况
• 致谢