沙利度胺联合三氧化二砷对急性髓系白血病细胞表达VEGF和P-gp的影响

论文摘要

目的:观察沙利度胺（TLD）和三氧化二砷（As2O3 ）对急性髓系白血病（AML）细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）和表达P-糖蛋白（P-gP）的影响。方法:收集AML患者和健康体检者的血液,肝素抗凝并离心后,吸取上层血浆置-20℃冰箱内冷冻保存。收集AML患者的骨髓液,用Ficoll淋巴细胞分离液分离出骨髓单个核细胞（BMMNC）。37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养细胞于RPMI l64O培养液中。HL-60/VCR细胞株的培养基中加入VCR以维持耐药性。TLD和As2O3以不同浓度加入培养体系中,同时设空白对照。用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）法检测血浆和细胞培养上清液中VEGF的浓度,用流式细胞术（FCM）检测细胞膜上MDR1/p-gp的表达率。结果:（1）AML患者血浆中VEGF浓度明显高于正常对照组（P<0.01）。（2）加入TLD和As2O3后,AML细胞和HL-60/VCR细胞株培养上清中VEGF浓度明显降低。（3）加入TLD和As2O3前后,AML细胞和HL-60/VCR细胞株的细胞膜上P-gP的表达率未见明显改变。（4）加入TLD和As2O3前后,AML细胞培养上清中VEGF的升高和细胞膜表面PgP的表达具有一定的正相关性。结论:（1）白血病细胞可以通过自分泌途径分泌VEGF。（2）TLD和AS2O3均可抑制HL-60/VCR和AML细胞分泌VEGF。（3）TLD和AS2O3均未能影响HL-60/VCR和AML细胞膜上P-gP的表达。（4）AML患者BMMNC培养上清中VEGF的升高和细胞膜表面PgP的表达具有一定的正相关性,二者联合检测可作为监测病情和判断预后的指标。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 细胞种类和来源
• 2.1.2 血液来源
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 主要实验仪器
• 2.1.5 溶液配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 HL－60/VCR 细胞的培养与传代
• 2.2.2 临床血液标本采集与处理
• 2.2.3 临床骨髓液标本采集与处理
• 2.2.4 HL-60/VCR 细胞和 BMMNC 分组培养并留取上清液以备检测VEGF 含量
• 2.2.5 流式细胞术检测MDR1/p-gp的表达率
• 2.2.6 ELISA 法定量检测血浆和细胞培养上清液中VEGF 含量
• 2.2.7 统计学分析
• 第3章 结果
• 3.1 血浆中VEGF 的含量
• 3.2 HL-60/VCR细胞培养上清液中VEGF的含量
• 3.3 BMMNC 培养上清液中VEGF 的含量
• 3.4 HL-60/VCR细胞膜表面PgP的表达率
• 3.5 BMMNC 细胞膜表面PgP 的表达率
• 3.6 非CR 患者PgP 表达率与VEGF 含量的相关性
• 第4章 讨论
• 4.1 白血病细胞的VEGF 自分泌途径
• 4.2 沙利度胺和三氧化二砷对白血病细胞分泌VEGF 的调节
• 4.3 沙利度胺和三氧化二砷对白血病细胞膜上PgP 表达率的影响
• 4.4 PgP表达率和VEGF含量对AML患者的预后监测
• 第5章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 进一步工作的方向
• 第6章 致谢
• 参考文献
• 附录 综述
• 攻读学位期间的研究成果