抑制结构蛋白基因对BMMSCs体外向心肌细胞分化过程中收缩蛋白基因表达的影响

论文摘要

目的: 探讨结构蛋白即肌联蛋白 titin 基因在骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs）体外向心肌细胞分化过程中的作用及其对收缩蛋白基因肌球蛋白重链的 β 亚单位（β-mysonheavy chain,β-MHC）和肌钙蛋白亚单位 I（Cardiac troponin I,cTnI）基因表达的影响。 材料和方法:无菌条件下冲洗 Wistar 大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓腔获得细胞,贴壁筛选法纯化 BMMSCs 并进行体外培养扩增。采用第4 代的 BMMSCs,在体外,5-氮杂胞苷（5-azacytidine,5-aza）诱导 24小时,分别在诱导后 1 天、4 天、7 天、14 天,显微镜下连续观察其形态变化,同时将携带有针对大鼠titinN2B区的siRNA重组质粒pSITITIN和针对人 β-actin 的 siRNA 重组质粒 pSIACTIN,利用脂质体将上述重组质粒分别转染入诱导后的 BMMSCs,转染后 24 小时,用 Tripure 提取各个时间点的 RNA,半定量 RT-PCR 技术检测各时间点干扰前后结构蛋白 titin 基因和收缩蛋白 β-MHC、cTnI 基因在 BMMSCs 体外心肌细胞样分化过程中的动态表达。 结果: 1. 诱导前 titin、β-MHC、cTnI 基因都有弱的表达,诱导后 titin、β-MHC、cTnI 基因的表达增强。 2. 重组质粒转染诱导后的 BMMSCs,titin 基因的表达减弱。 3. titin 基因的表达被干扰后,β-MHC 基因的表达无明显变化,而

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• S 体外向心肌细胞分化过程中收缩蛋白基因表达的影响'>论文正文 抑制结构蛋白基因对 BMMSC_S体外向心肌细胞分化过程中收缩蛋白基因表达的影响
• 前言
• 第一部分 抑制结构蛋白基因对BMMSCS体外向心肌细胞分化过程中收缩蛋白基因表达的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 附图
• 第二部分 经BMMSCs 诱导分化的心肌样细胞离子通道基因的表达
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 附图
• 参考文献
• 综述 膜片钳技术应用于心肌疾病研究的进展
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文