酶法与化学法相结合合成胸腺五肽前体三肽

论文摘要

胸腺五肽（TP-5）是人工合成的五肽（Arg-Lys-Asp-Val-Tyr）,对应胸腺生成素的32至36位氨基酸序列,具有天然胸腺生成素的全部生物活性。本文探究了NCA化学法合成胸腺五肽前体二肽Val-Tyr-OH的反应条件的优化以及产物分离方法,进行了此二肽的酯化以及氨解。初步探究了用alcalase酶促合成Z-Asp-Val-Tyr-OH的反应条件以及产物分离分析方法。在Val-Tyr-OH二肽合成中,根据实验对比,我们选择了与传统的全水相缓冲体系不同的两相反应体系合成了Val-Tyr-OH,并考察了有机溶剂,搅拌速度,反应温度,反应时间,活化pH值等一系列因素对二肽产率的影响,优化了反应条件,建立了最佳反应体系:1.1g酪氨酸（0.006mol）和1g Na2CO3溶于40ml蒸馏水中,再向其中加入10ml 1N的NaOH,形成澄清的溶液,然后加入50ml乙腈,溶液分为上下两层,将此两相溶液冷却到-10℃,将事先冷却到-10℃含有0.95gNCA-Val（0.0066mol）的乙腈溶液加入到此两相体系里,磁力搅拌（>1500rpm）下开始反应,两个小时后反应结束,停止搅拌,静置分层,分去上相的乙腈,水相在冷却下用50ml事先冷却好的乙腈再洗一次,以尽量洗净未反应的NCA-Val,然后用浓硫酸调到pH5左右。旋转蒸发至干燥,加入100ml乙醇进行抽提,过滤除去盐,将乙醇溶液蒸干,加水溶解产物,低温真空干燥,即得产物二肽1.65g, HPLC纯度93.61%,产率91.36%。在Z-Asp-Val-Tyr-OH的合成中,通过正交实验初步建立了反应模型:Nα-Z-L-Asp-OMe（0.05M）加Val-Tyr-OH（0.15M）,加950μl乙酸乙酯,磁力搅拌下25℃保温10分钟,把50μl经过处理的alcalase加入到50μl 0.1M的pH10.0的Na2CO3-NaHCO3缓冲液中,25℃保温10分钟,将二者混合,25℃下磁力搅拌下开始反应,反应时间为3小时,对照产物峰的HPLC纯度80.84%。

论文目录

• 内容提要
• 前言
• 一、生物活性肽
• 二、胸腺五肽（TP-5）
• 三、肽的合成
• 四、常用的小肽分离手段
• 五、TP－5 的合成路线设计思路
• 六、附注
• 材料与仪器
• 一、实验材料
• 二、实验仪器
• 实验方法
• 一、ALCALASE 活力测定
• 二、肽的合成
• 三、肽产物的分离纯化
• 四、产率计算
• 五、产物鉴定
• 结果与讨论
• 一、NCA-VAL 的合成
• 二、NCA-VAL 的纯化处理和鉴定
• 三、VAL-TYR-OH 二肽的合成
• 四、二肽分离纯化和鉴定
• 五、二肽的酯化
• 六、Z-ASP-VAL-TYR-OH 三肽的合成
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 致谢