TNF对转染TNFR2的Hep2细胞影响的研究

论文摘要

喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一。治疗方法主要以手术治疗为主,放疗、化疗等为辅。虽然由于现代医疗技术的发展,喉癌治疗的五年生存率已大大提高,但仍有部分病人死于复发和转移。目前公认,喉癌与其它恶性肿瘤一样是基因性疾病。近年来,基于分子生物学和相关技术的飞跃发展,对包括喉癌在内的各种肿瘤发病的分子机理有了一定的了解,但还没有突破性进展。肿瘤坏死因子（TNF）是由单核细胞、巨噬细胞或淋巴细胞分泌产生的一种多功能细胞因子,在细胞生长,细胞分化,炎症反应,免疫调节,抗肿瘤、微生物与寄生虫感染等方面起重要作用。TNF主要通过TNFR1及TNFR2实现其生物学功能。有关TNF的临床实验已经实行,发现其副作用较多。本文应用免疫组织化学染色、原位末端标记法、流式细胞仪、基因转染等技术,研究了喉鳞癌组织中肿瘤坏死因子受体、肿瘤坏死因子受体相关因子2的表达,并进一步以Hep2细胞为研究对象,研究了肿瘤坏死因子受体的表达,及转染TNFR2对Hep2细胞TNF敏感性的影响,并用统计学的方法对实验结果进行了分析。在本实验中,我们发现以下结果:1、喉鳞癌组织中TNFR1、TNFR2、TRAF2的阳性表达率分别为63.6%、6.1%、69.7%,TNFR1与TRAF2的表达呈明显的正相关。在TNFR1、TRAF2阳性表达的喉鳞癌组织,癌细胞的凋亡指数明显低于TNFR1、TRAF2阴性表达的喉鳞癌组织,分别为p<0.05及p<0.01。2、Hep2细胞在主要表达TNFR1的同时,也微量表达TNFR2。3、TNF-α对Hep2细胞有一定的杀伤作用,且作用强度具有浓度及时间依赖性。4、转染TNFR2的Hep2细胞对TNF-α的敏感性明显增强,且具有浓度及时间依赖性。通过对转染TNFR2的Hep2细胞对TNF-α敏感性的检测,为喉癌的转基因治疗提供了理论基础。

论文目录

• 前言
• 第一章 TNF研究综述
• 一、TNF信号转导的研究进展
• 1 TNF的结构
• 2 TNFR的种类
• 3 TNFR的细胞分布
• 4 TNFR介导的信号转导
• 5 TRAF的种类和结构
• 6 TRAF2的作用
• 二、TNF临床应用的研究进展
• 1 TNF的产生和制备
• 2 TNF治疗肿瘤的机理
• 3 肿瘤细胞对TNF的敏感性
• 4 TNF临床应用的毒性反应
• 5 TNF临床应用的改进
• 第二章 材料与方法
• 一、实验材料
• （一） 组织标本来源
• （二） 试剂
• （三） 质粒、宿主菌和细胞株
• （四） 主要仪器
• 二、主要方法
• （一） 组织标本的免疫组化检测
• （二） 细胞培养
• （三） 细胞表面TNFR的检测
• （四） 细胞死亡率的检测
• （五） TNF-α诱导的细胞凋亡
• （六） 质粒的扩增
• （七） 质粒的转染
• （八） 瞬间转染后Hep2细胞TNFR表达的检测
• （九） 统计学分析
• 第三章 实验结果
• 一、TNFR1、TNFR2及TRAF2在喉鳞癌组织中的表达
• （一） 组织标本的一般情况
• （二） 喉鳞癌组织中TNFR1、TNFR2的表达及其与喉鳞癌生物学行为的关系
• （三） 喉鳞癌组织中TRAF2的表达及其与喉鳞癌生物学行为的关系
• （四） 喉鳞癌组织中TRAF2表达与TNFR1表达的相关性
• （五） 喉鳞癌组织中TNFR1、TRAF2的表达与喉鳞癌细胞凋亡的相关性
• 二、TNFR1、TNFR2在Hep2细胞中的表达
• 三、TNF-α对Hep2细胞凋亡及细胞周期的影响
• （一） 凋亡细胞形态的观察
• （二） DNA电泳结果
• （三） TNF-α对Hep2细胞的抑制作用
• （四） TNF-α对Hep2细胞周期的影响
• 四、TNF-α对瞬时转染TNFR2的Hep2细胞的影响
• （一） 提取的pcDNA3-TNFR2质粒电泳鉴定
• （二） pcDNA3-TNFR2瞬间转染的Hep2细胞TNFR2表达的检测
• （三） TNF-α对pcDNA3-TNFR2-Hep2细胞的抑制作用图
• 第四章 讨论
• 一、TNFR1、TNFR2、TRAF2在喉鳞癌组织中的表达及其与肿瘤发生发展的关系
• 二、TNFR1、TNFR2在Hep2细胞中的表达
• 三、TNF-α对Hep2细胞凋亡及细胞周期的影响
• 四、TNF-α对瞬时转染TNFR2的Hep2细胞的影响
• 结论
• 参考文献
• 攻读博士学位期间已（或待）发表的文章
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 致 谢
• 个 人 简 历
• 创新性声明