导读:本文包含了双价载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:甘蓝型油菜,植酸酶基因,遗传转化,特异性启动子
双价载体论文文献综述
王朋宝,张晶晶,石菁,王威,曹智[1]（2019）在《抗草甘膦与磷高效吸收基因双价表达载体的构建及对甘蓝型油菜的遗传转化》一文中研究指出【目的】甘蓝型油菜是产油效率较高的油料作物,在其生长过程中往往伴随着土壤环境中磷素匮乏及杂草胁迫,严重影响着最终产量和品质.因此,同时解决有效磷匮乏及草害问题已经成为目前油菜研究的重要方向.【方法】采用PCR法克隆得到了与草甘膦抗性(eCTP和EPSPS)和磷高效吸收(Pht1;2和phyA)的相关目的基因,随后构建了双价植物表达载体,通过农杆菌介导法转化甘蓝型油菜,对转化植株进行PCR检测筛选,并通过qRT-PCR法对筛选的阳性植株内目的基因的表达进行定量分析.【结果】将PCR扩增得到的片段经琼脂糖凝胶电泳检测,结果符合预期.测序结果也与GenBank注册序列同源性高度一致,可用于后续试验.对转基因油菜进行草甘膦抗性筛选和PCR扩增检测,共获得5株转基因阳性植株.实时荧光定量结果发现转基因阳性植株内phyA和EPSPS基因的表达量均较对照植株有显着提高.【结论】本研究成功构建了抗草甘膦和磷高效吸收基因双价植物表达载体,获得的转基因阳性植株同时兼具草甘膦抗性及磷素高效吸收利用的特性,为培育甘蓝型油菜优良种质资源提供了理论依据.(本文来源于《甘肃农业大学学报》期刊2019年03期）
蒋文明,侯广宇,李金平,程善菊,王素春[2]（2018）在《利用一种流感病毒载体同时表达H5和H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白双价疫苗的构建与免疫效力试验》一文中研究指出2014年以来,第2.3.4.4分支的H5亚型高致病性禽流感病毒在我国广泛流行,成为主要的H5病毒流行分支。2017年以来,H7N9亚型禽流感病毒由低致病性病毒变异为高致病性病毒,给家禽业造成了巨大的经济损失。2017年9月以来,农业部在全国实施H5和H7N9疫苗的强制性免疫。在疫苗生产过程中,需要将Re-8和H7 Re1两个疫苗毒株分别经鸡胚增殖后,进行浓缩和配比,因此需要更多的鸡胚(本文来源于《中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集》期刊2018-11-21）
王朋宝[3]（2018）在《抗草甘膦和提高磷吸收的双价基因载体构建及对甘蓝型油菜的遗传转化研究》一文中研究指出甘蓝型油菜从植物分类学上属十字花科芸薹属(Brassica),是我国极其重要的油料、饲用作物。随着社会化进程不断加深和经济的飞速增长,人们对植物油需求量急剧增加,这对甘蓝型油菜生产提出了新的挑战。由于其生长过程中常常受到有效磷匮乏及草害影响,大大限制了它的发展。因此,为获得高效磷素吸收利用同时兼具草甘膦抗性的甘蓝型油菜新种质,本研究构建了含有油菜叶绿体导肽eCTP、草甘膦抗性基因EPSPS、根部特异性启动子Pht1;2和植酸酶基因phyA的植物重组表达载体pC-NLTA。并采用农杆菌介导法转化甘蓝型油菜‘陇上东’、‘1831R’和‘新疆21109’叁个品种,对于确定转基因甘蓝型油菜磷素吸收及草甘膦抗性具有一定的理论研究意义,同时也为获得磷素高效吸收利用兼具草甘膦抗性的新型油菜种质资源提供研究的理论依据和参考。本试验主要研究结果如下:1.运用生物信息学软件:TargetP 1.1 Server和ChloroP 1.1 Server预测了油菜rbcS的亚细胞定位,同时也得到了其编码氨基酸序列中的转运肽和剪切位点,分析整理得到了理想的转运肽序列并命名为eCTP;2.以质粒pMD-nos为模板亚克隆得到nos终止子,以甘蓝型油菜RG2 cDNA为模板克隆得到叶绿体转运肽eCTP,以质粒pTOPO-EPSPS为模板亚克隆得到EPSPS基因,以提取的野生型拟南芥的DNA为模板克隆得到根特异性启动子Pht1;2,以质粒PGA1611-E-PhpAO为模板亚克隆得到phyA基因,采用重迭PCR方法将叶绿体转运肽eCTP与EPSPS基因融合,得到了融合片段L;3.以pCEPSP为基础载体,采用酶切连接的方法,依次插入nos终止子、融合片段L、根特异性启动子Pht1;2及植酸酶基因phyA,最终构建获得了植物重组表达载体pC-NLTA,并利用冻融转化法将其整合到了农杆菌LBA4404中;4.采用农杆菌介导法转化叁个品种甘蓝型油菜(‘新疆21109’、‘1831R’和‘陇上东’),经过草甘膦抗性筛选和PCR扩增检测,分别得到2株‘新疆21109’阳性转基因植株、2株‘1831R’阳性转基因植株和1株‘陇上东’阳性转基因植株;5.利用qRT-PCR技术对T0代阳性植株内各基因的表达进行检测,结果表明,与对照植株相比,阳性植株内植酸酶基因phyA和草甘膦抗性基因EPSPS的表达量均得到显着提高。(本文来源于《甘肃农业大学》期刊2018-05-01）
穆一帆,钟广炎,高峰,钟云,胡敏伦[4]（2017）在《NPR1和Defensin双价抗病基因过量表达载体构建及其对沙田柚的遗传转化》一文中研究指出通过PCR技术,从克里曼丁橘和荔枝品种"叁月红"叶片中克隆获得了NPR1和Defensin基因序列.以p BI-121作为载体骨架,构建了NPR1和Defensin双价抗病基因过量表达载体,命名为ND-p BI121.通过根癌农杆菌介导的遗传转化,获得了6株PCR检测为阳性的双抗沙田柚植株,为探究NPR1和Defensin基因的过量表达对柑橘黄龙病的抗性影响提供试材.(本文来源于《华南师范大学学报(自然科学版)》期刊2017年06期）
王琨,裴娟,黎玉顺,祝建波,向本春[5]（2017）在《啤酒花抗病毒双价RNAi植物表达载体的构建及遗传转化》一文中研究指出为了构建对啤酒花潜隐病毒(Hp LV)和啤酒花潜隐类病毒(HpLVd)有抗性的RNAi载体,本研究通过序列比对选取Hp LV外壳蛋白基因致病区202 bp和HpLVd 155 bp的保守序列作为干扰序列,以干扰载体p UCCRNAi为基础,成功构建出针对Hp LV和HpLVd的双价RNAi载体,通过特异性酶切位点将构建成功的RNAi载体的功能区域连接在植物表达载体p CAMBIA2300-35S-OCS上,并利用农杆菌介导法将目的基因导入啤酒花中。经PCR鉴定证明RNAi载体已成功转入啤酒花中。本研究基于RNAi技术的植物表达载体构建和农杆菌介导的遗传转化,为诱导转基因植物的转录后基因沉默、获得抗多种病毒病的植物新材料提供参考。(本文来源于《山东农业科学》期刊2017年01期）
徐林,黄静,孔华,郭安平[6]（2016）在《果胶裂解酶基因pelC和木聚糖酶基因xyn2双价酵母表达载体的构建》一文中研究指出【研究目的】菠萝叶纤维作为新型纺织材料备受关注,但菠萝叶纤维需要脱胶才能纺纱。胶质的主要成分是果胶和半纤维素,所以果胶裂解酶和木聚糖酶在生物脱胶过程中起到了关键作用。构建果胶裂解酶和木聚糖酶双价酵母表达载体将为双基因共表达提供基础。【方法】采用双基因同向连接的策略构建双价表达载体。设计引物分别从p Pic9K-pel C与p Pic9K-xyn2单价载体中扩增连接片段,再将分别双酶切p Pic9K、pel C、xyn2片段通过粘性末端连接构建双价载体。通过PCR、酶切和测序等方法进行验证。【结果】通过引物及酶切位点设计和酶切连接,成功构建了大小为12916bp的p Pic9K-pel C-xyn2双价酵母表达载体,其中外源基因都单独含有AOX强启动子和终止子。【结论】成功构建了果胶裂解酶基因pel C和木聚糖酶基因xyn2双价酵母表达载体,为菠萝叶纤维脱胶双价工程菌应用研究提供了基础。(本文来源于《中国热带作物学会2016年学术年会论文集》期刊2016-11-09）
刘小微,李厚华,王冰洁,费昭雪,阙怡[7]（2016）在《AmAS1与Am4’CGT基因双价载体构建及在海棠花中的瞬时表达》一文中研究指出以黄色金鱼草(Antirrhinum majus)、"雪球"海棠(Malus‘Snow drift’)为试材,采用农杆菌介导法,将构建的金鱼草素合酶基因(aureusidin synthase,AmAS1)和查尔酮4’-O-葡萄糖苷转移酶基因(chalcone 4’-O-glucosyltransferase,Am4’CGT)双价表达载体在"雪球"活体花瓣上进行瞬时表达,并通过高效液相色谱分析和基因表达分析对瞬时表达效果进行鉴定。结果表明:成功构建双价表达载体CGT-AS-pCambia 1302,农杆菌侵染"雪球"花苞后,花苞呈现淡黄色,表明目的基因已在花瓣内转录并表达。高效液相色谱分析发现,侵染后的花苞出现新的吸收峰,进一步确定花瓣内有橙酮物质的合成。(本文来源于《北方园艺》期刊2016年14期）
耿文超[8]（2016）在《棉叶螨TtAK与TtCHI双价RNAi载体的构建及抗虫性初步研究》一文中研究指出目的:棉花是我国重要的经济作物之一。由于新疆特有的荒漠绿洲灌溉农业,使新疆成为我国重要的棉花生产基地。2015年,新疆棉花年播种面积约占全国的四成以上,产量占全国的六成以上。近些年,随着新疆棉花滴灌面积不断扩大,使棉田小生境和农田生态环境逐渐发生改变,并且由于长期依赖化学药剂防治,不仅增强了棉叶螨的抗药性,而且还杀死大量叶螨的天敌,再加上生产上没有抗叶螨棉花品种,致使近几年害螨连年爆发,严重影响了新疆棉花的产量和品质。因此,培育抗叶螨新品种,降低棉叶螨的危害程度,是新疆棉花生产上急需解决的重要问题。随着,RNAi技术已成功应用于改良植物的抗病性、抗虫性等方面。利用转基因技术在植物体内表达昆虫基因的双链RNA(ds RNA),当植食性昆虫取食转基因植物时,可有效抑制昆虫相应靶标基因的表达,进而导致昆虫的发育与生长缺陷,甚至还可杀死害虫。并且在昆虫中,那些编码重要蛋白的功能基因则是很好的RNAi靶标。大量研究表明,精氨酸激酶(Arginine Kinase,AK)是参与能量代谢的关键酶,几丁质酶(Chitinase,CHI)是昆虫发育过程中确保蜕皮的完成及外骨骼、围食膜和气管等再生的重要的酶,这两个关键酶基因对昆虫的生长发育起着至关重要的作用。通过植物介导的RNAi技术抑制叶螨的两个关键酶基因的表达并进行相关研究,以期创制出抗叶螨新种质。方法:(1)利用生物信息学软件对序列进行分析与比对,以棉叶螨(Tetranychus turkestani)c DNA为模板,分别克隆Tt AK与Tt CHI部分功能片段。(2)利用标准DNA重组与Gateway技术构建含有双价基因干扰载体,遗传转化模式植物烟草和棉花。(3)利用q RT-PCR技术,鉴定不同转基因烟草株系融合片段AK-CHI的表达。(4)通过接螨实验,分析抑制融合片段AK-CHI后对土耳其斯坦叶螨的影响。结果与结论:应用生物信息学软件对已报道的棉叶螨的两个靶标基因Tt AK与Tt CHI基因进行功能区域序列分析和比对,分别扩增获得靶标基因Tt AK与Tt CHI的功能区域片段453 bp与610 bp,设计含有特定酶切位点的特异性引物,采用标准DNA重组技术与Gateway技术相结合的方法,以RNAi载体p B7GWIWG2(II)与p ANDAHK35为基础,分别成功构建出B7GWIWG2(Ⅱ)-AK-CHI与p ANDAHK35-AK-CHI双基因干扰载体。2.将构建好的植物干扰载体p B7GWIWG2(Ⅱ)-AK-CHI通过叶盘法转化烟草,经过Basta抗性筛选后共获得50株抗性烟草,提取基因组DNA,经过PCR验证,获得20株阳性转基因烟草。选取并提取7株转基因烟草总RNA,反转录为c DNA。在RNA水平上利用q RT-PCR技术,鉴定融合靶标基因AK-CHI的表达量。选择表达量高的3个阳性株系,在转基因与野生型烟草上进行接虫实验,实验结果表明:抑制Tt AK和Tt CHI双基因的转基因烟草显着降低了叶螨的存活率,产卵量减少约23%-30%,叶螨生育周期缩短约4 d,但对其卵的孵化率并没有影响。3.将构建好的干扰载体p ANDAHK35-AK-CHI通过农杆菌介导法侵染棉花YZ-1下胚轴,继代获得胚性愈伤,提取胚性愈伤的DNA进行PCR验证,获得阳性胚性愈伤,阳性率高达60%以上。(本文来源于《石河子大学》期刊2016-06-01）
曲静,王丕武,关淑艳,范玉广,刘思言[9]（2015）在《β-伴大豆球蛋白α'亚基和β亚基基因双价RNAi表达载体抑制大豆抗原蛋白的表达》一文中研究指出为幼龄动物提供优质的大豆饲料,同时有效抑制α'亚基和β亚基基因表达量,根据dsRNAi原理,以α'亚基基因RNAi重组植物表达载体p CAMBIA3301-PFNZ-BADH为基础,构建以BADH安全标记为筛选标记的α'亚基和β亚基基因双价RNAi植物表达载体。用根癌农杆菌介导法转化大豆子叶节,并对再生植株进行分子生物学检测。结果表明:成功构建β-伴大豆球蛋白α'亚基和β亚基基因双价RNAi表达载体,并获得大豆转基因植株。T1转基因大豆植株经PCR检测得到11株阳性转化株,经Southern杂交检测证明构建的双价植物表达载体已经以1~2个拷贝整合到大豆基因组中,实时荧光定量PCR检测表明β-伴大豆球蛋白α'亚基和β亚基基因的表达被明显抑制。(本文来源于《中国油料作物学报》期刊2015年05期）
张学明,宋阳,王丕武,马建,晏佳琳[10]（2015）在《大豆凝集素和脂肪氧化酶双价RNAi表达载体的构建及其遗传转化》一文中研究指出【目的】应用RNA干扰技术,同时抑制大豆凝集素(Soybean agglutinin,SBA)和脂肪氧化酶(Lipoxygenase,Lox)基因在种子中的表达,改良大豆营养品质,为培育优质大豆材料奠定基础。【方法】根据RNAi原理,酶切获得Lox目的片段,构建以除草剂Bar基因为筛选标记、种子特异性启动子P7αP启动SBA和Lox双干扰的pCAMBIA3301-SBA-Lox(pSBA-Lox)干扰表达载体,并通过农杆菌介导法转化大豆(品种为吉农28),采用PCR、Southern杂交和实时荧光定量PCR对转基因植株进行检测。【结果】质粒PCR和酶切鉴定结果表明,双价RNAi植物表达载体pSBA-Lox构建成功。将其转入到大豆中,对转化植株进行PCR、Southern杂交检测,结果显示,外源基因以单拷贝形式整合到植物基因组中,并能遗传给后代。T1代转基因植株的实时荧光定量PCR分析显示,转基因植株中SBA基因和Lox基因在籽粒中的表达量比未转化受体植株均明显降低,SBA基因表达量降低了35.9%~47.2%,Lox基因表达量降低了32.8%~56.1%,而在幼嫩叶片中的表达量相比对照植株变化不大。【结论】获得了大豆凝集素和脂肪氧化酶表达量均明显降低的T1代转基因大豆。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2015年07期）
双价载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
2014年以来,第2.3.4.4分支的H5亚型高致病性禽流感病毒在我国广泛流行,成为主要的H5病毒流行分支。2017年以来,H7N9亚型禽流感病毒由低致病性病毒变异为高致病性病毒,给家禽业造成了巨大的经济损失。2017年9月以来,农业部在全国实施H5和H7N9疫苗的强制性免疫。在疫苗生产过程中,需要将Re-8和H7 Re1两个疫苗毒株分别经鸡胚增殖后,进行浓缩和配比,因此需要更多的鸡胚
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
双价载体论文参考文献
[1].王朋宝,张晶晶,石菁,王威,曹智.抗草甘膦与磷高效吸收基因双价表达载体的构建及对甘蓝型油菜的遗传转化[J].甘肃农业大学学报.2019
[2].蒋文明,侯广宇,李金平,程善菊,王素春.利用一种流感病毒载体同时表达H5和H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白双价疫苗的构建与免疫效力试验[C].中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集.2018
[3].王朋宝.抗草甘膦和提高磷吸收的双价基因载体构建及对甘蓝型油菜的遗传转化研究[D].甘肃农业大学.2018
[4].穆一帆,钟广炎,高峰,钟云,胡敏伦.NPR1和Defensin双价抗病基因过量表达载体构建及其对沙田柚的遗传转化[J].华南师范大学学报(自然科学版).2017
[5].王琨,裴娟,黎玉顺,祝建波,向本春.啤酒花抗病毒双价RNAi植物表达载体的构建及遗传转化[J].山东农业科学.2017
[6].徐林,黄静,孔华,郭安平.果胶裂解酶基因pelC和木聚糖酶基因xyn2双价酵母表达载体的构建[C].中国热带作物学会2016年学术年会论文集.2016
[7].刘小微,李厚华,王冰洁,费昭雪,阙怡.AmAS1与Am4’CGT基因双价载体构建及在海棠花中的瞬时表达[J].北方园艺.2016
[8].耿文超.棉叶螨TtAK与TtCHI双价RNAi载体的构建及抗虫性初步研究[D].石河子大学.2016
[9].曲静,王丕武,关淑艳,范玉广,刘思言.β-伴大豆球蛋白α'亚基和β亚基基因双价RNAi表达载体抑制大豆抗原蛋白的表达[J].中国油料作物学报.2015
[10].张学明,宋阳,王丕武,马建,晏佳琳.大豆凝集素和脂肪氧化酶双价RNAi表达载体的构建及其遗传转化[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2015