论文摘要
猪圆环病毒2型（porcine circovirus 2, PCV2）与猪群中发生的多种疾病相关,已被证明是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS）等相关疾病的重要病原。自1991年在加拿大断奶仔猪群中首次发现PMWS以来,世界上许多养猪国家和地区都报道了该病的发生和流行。本病主要临床症状为消瘦、呼吸困难、淋巴结肿大、腹泻、皮肤苍白及黄疸。目前国内外都在致力于研发有效控制和消灭PCV2流行的有效疫苗并取得一定进展,有些疫苗已经投入到临床试验和综合评价中。本研究旨在通过本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒PCV1-2及真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-orf2作为免疫原免疫商品猪,对免疫后猪体的各项指标进行综合评价,探讨其用于PCV2感染疾病预防的有效性,为使该疫苗能够进入商品化奠定基础。同时,为了配合疫苗研究,为之提供必需的抗体检测方法,本文还建立了猪圆环病毒间接免疫荧光抗体检测方法,对于流行病学调查、临床诊断和疫苗抗体水平检测都有一定的帮助。1嵌合型猪圆环病毒PCV1-2及PCV2 ORF2真核表达质粒对商品猪的免疫保护研究应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒PCV1-2及真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-orf2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0.07-0.60不等的商品猪,九头猪随机分为四组,第1组为3头,其余3组均为2头。第1组肌肉注射免疫TCID50为10 3.5的PCV1-2病毒/头,第2组肌肉注射真核表达质粒200μg/头,第3组肌肉注射空载体（pcDNA3.1）200μg/头,第4组不免疫作为攻毒对照组。在免疫后42天,PCV1-2组及真核表达质粒组产生了PCV2抗体。免疫后42天所有试验猪攻毒PCV2和PRRSV,剂量分别为2×104.5 TCID50/头和106 TCID50/头。攻毒后21天,攻毒对照组猪淋巴结比免疫组猪显著肿大,免疫组猪血清、淋巴结中PCV2病毒载量低于对照组,攻毒对照组猪淋巴结中PCV2抗原含量高于免疫组。上述结果表明,嵌合型猪圆环病毒PCV1-2及真核表达质粒肌肉注射免疫商品猪后,对PCV2感染能产生保护性免疫应答,有可能成为候选疫苗。2间接免疫荧光检测猪圆环病毒2型抗体方法的建立将接种PCV2且多次传代的Dulac细胞分散到96孔细胞培养板上,将待检血清样品作倍比稀释,应用免疫荧光技术检测血清中PCV2抗体效价。此方法不与猪瘟（CSF）、猪伪狂犬病（PR）、猪细小病毒感染（PPV infection）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的阳性血清发生交叉反应,具有良好的特异性。对172份临床血清样品进行检测,结果与PCV2 ELISA试剂盒检测结果相符合,说明所建立的方法具有一定的可靠性。PCV2抗体的间接免疫荧光检测技术,可用于PCV2抗体水平的监测,为今后猪圆环病毒疫苗免疫效力和免疫效果的跟踪检测提供了可供选择的方法。
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