论文摘要
研究背景中药配方颗粒又称免煎中药、单味中药浓缩颗粒,是用单味中药饮片作为原料,经现代制药技术提取、浓缩、分离、干燥、制粒、包装、精制而成的新剂型。中药免煎颗粒遵循了中医药的基本理论；保持了汤剂的固有特点；克服了汤剂服用、携带、保管不方便等缺点,近年来已得到广泛的应用。动物药免煎颗粒剂也已经广泛应用,但由于动物药饮片的物质基础研究比较薄弱,化学成分与药效间的关系复杂,饮片的质量标准存在不足,还有待完善。目前,更没有关于动物药免煎颗粒剂的系统研究。因此,本课题将对动物药醋龟甲免煎颗粒剂进行系统的研究。目前,醋龟甲免煎颗粒剂临床上已有应用,但未见关于其质量标准以及制备工艺的药效学评价,因此,本课题将从醋龟甲饮片的质量标准,醋龟甲免煎颗粒剂制备工艺及质量标准进行研究,并通过动物实验对醋龟甲免煎颗粒的药效学进行研究,以评价醋龟甲免煎颗粒剂的制备工艺进行。目的1、对国内外有关醋龟甲的研究文献进行分类综述,对目前国内外对醋龟甲的化学成分及药理作用的主要研究概况加以合理分析。2、建立醋龟甲饮片的质量控制标准。3、制定醋龟甲免煎颗粒剂的制备工艺。4、用小鼠血虚和骨质疏松模型,评价制备工艺。5、建立醋龟甲免煎颗粒剂的质量标准。方法1、以计算机检索、手工追溯检索等手段相结合,充分利用PubMed、CNKI中国期刊全文文数据库、互联网等工具数据库与工具书,查阅有关醋龟甲的化学成分、药理作用以及临床应用、现代制剂等资料,对醋龟甲的研究概况进行科学分析。2、醋龟甲饮片质量标准的研究2.1醋龟甲饮片的鉴定：2.1.1性状鉴定：按照（中国药典2010版一部168龟甲项下）性状鉴定。2.1.2薄层色谱法：按照（中国药典2010版一部168龟甲项下）薄层色谱鉴定。2.1.3钙的鉴定：按照（中国药典2010版一部634龙母壮骨颗粒项下）鉴别①鉴定。2.2醋龟甲浸出物的得率测定：按照水溶性浸出物测定法（中国药典2010版一部附录XA）项下的热浸法测定。2.3醋龟甲饮片中钙含量的测定：按（中国药典2010版一部161牡蛎项下）钙黄绿素法测定。2.4醋龟甲饮片中羟脯氨酸含量的测定：采用高相液相色谱仪-蒸发光散射检测法建立快速、科学、稳定的羟脯氨酸含量测定方法。3、醋龟甲免煎颗粒剂制备工艺的研究3.1醋龟甲浸膏的制备：采用等量值法。3.2醋龟甲浸膏中间体的质量控制。3.2.1醋龟甲浸膏中钙含量的测定：按（中国药典2010版一部161牡蛎项下）钙黄绿素法测定。3.2.2醋龟甲浸膏中羟脯氨酸含量的测定：采用高相液相色谱仪-蒸发光散射检测法测定。3.3辅料的筛选：根据免煎颗粒剂的特点,考察辅料的种类及其用量。3.4醋龟甲免煎颗粒剂的制备：采用挤压制粒法。3.5醋龟甲免煎颗粒剂的常规检查3.5.1粒度：照粒度测定法（中国药典2010版一部附录ⅪB第二法,双筛分法）测定。3.5.2水分：照水分测定法第一法（中国药典2010版一部附录ⅨH）烘干法测定。3.5.3溶化性：按照颗粒剂（中国药典2010版一部附录IC）项下的规定测定。4、醋龟甲免煎颗粒剂质量标准的研究。4.1免煎颗粒的鉴定：按照（中国药典2010版一部634龙母壮骨颗粒项下）鉴别①鉴定。4.2免煎颗粒中钙含量的测定：按钙黄绿素法（中国药典2010版一部161牡蛎项下）测定钙含量。4.3免煎颗粒羟脯氨酸含量的测定：高效液相色谱-蒸发光散射法测定。5、醋龟甲水煎出物的药效学研究采用环磷酰胺（CY）所致的小鼠血虚模型,观察醋龟甲水煎出物与细粉对小鼠红细胞（RBC）,白细胞（WBC）,血小板（PLT）,红细胞压积比（HCT）及骨髓有核细胞（BMNC）的影响。采用维甲酸所致的小鼠骨质疏松模型,观察醋龟甲水煎出物与细粉对小鼠胸腺系数,肝脏系数,脾系数,卵巢系数、去脂干重、灰重、股骨中钙、磷,血清中血碱性磷酸酶（ALP）的影响。6、统计学处理采用SPSS13.0统计软件。实验数据采用均数±标准差（i±s）表示,比较运用单因素方差分析（One-Way ANOVA）,组间多重比较方差齐时,用LSD方法,不齐时用Dunnett’s T3。P＜0.05为差异有统计学意义。结果1、经查阅,有关醋龟甲的文献多集中在药材的质量、药理药效及临床应用研究；通过综述查阅的文献,确定了制备醋龟甲免煎颗粒剂的研究方法。2、醋龟甲饮片质量标准的研究经鉴定,与胆甾醇对照品和龟甲对照药材相比,五批醋龟甲饮片在相同位置均出现斑点。醋龟甲细粉0.1g,加水15mL,滤过,滤液调节pH使恰呈酸性,加草酸铵试液,生成白色沉淀；分离,沉淀不溶于醋酸,溶于盐酸。五批醋龟甲饮片中,浸出物得率分别为（%）：10.30、10.58、10.37、8.66、10.46,钙含量分别为（%）：31.38、28.97、27.77、28.77、26.53,羟脯氨酸的含量分别为（%）：1.67、2.14、1.98、2.43、1.88。3、醋龟甲免煎颗粒剂的制备3.1醋龟甲浸膏的制备采用等量值法制备醋龟甲浸膏,五批浸膏的得率分别为6.26%,6.95%,7.05%,8.34%,7.36%。3.2醋龟甲浸膏中间体的质量控制五批醋龟甲浸膏中,钙含量分别为（%）：5.21、5.24、6.17、5.25、5.67,羟脯氨酸含量分别为（%）：5.34、5.01、4.24、4.56、4.65。3.3辅料的筛选以95%乙醇为润湿剂时,加2倍与浸膏量的可溶性淀粉制粒。成形性良好,颗粒易制得且粒度合格。3.4醋龟甲免煎颗粒的制备取干膏,加2倍于干膏量的可溶性淀粉,滴加95%乙醇,并用手指不断搓捏,混匀,至“手捏成团,压之即散”,制软材,在16目筛上制粒,放入烘箱内,60℃,3小时,即可。混匀,制成颗粒,干燥,即得。3.5醋龟甲免煎颗粒剂的常规检查五批药材制得的免煎颗粒中,不能通过一号筛与能通过五号筛的总和分别为（%）：8.79、7.20、6.9、6.60、8.18；水分含量分别为（%）：4.01、3.88、4.05、4.06、3.94；溶化性：全部混悬均匀；流动性：用固定漏斗法测得五批药材制得的颗粒的流动性良好。4、醋龟甲免煎颗粒质量标准的研究4.1免煎颗粒的鉴定取本品1g,研细,加水15mL,滤过,滤液调节pH使恰呈酸性,加草酸铵试液,生成白色沉淀；分离,沉淀不溶于醋酸,但溶于盐酸。4.2免煎颗粒中钙及羟脯氨酸含量的测定五批醋龟甲免煎颗粒中,钙的含量分别为（mg/袋）：12.90、14.47、16.78、17.10、16.31,羟脯氨酸的含量分别为（mg/袋）：13.26、14.03、13.54、12.30、14.58。5、醋龟甲水煎出物的药效学研究5.1醋龟甲水煎出物与细粉对小鼠血虚模型的影响在小鼠血虚实验中,各组小鼠的外周血象和骨髓有核细胞数经One-Way ANOVA分析,组间均有显著性差异,需进一步两两比较。结果,模型组各指标较空白组均有显著下降,提示环磷酰胺造血虚模型成功。WBC：与模型组比较,细粉低剂量组和细粉高剂量组有显著性差异；细粉低剂量组与细粉高剂量组之间无显著差异。RBC：与模型组比较,煎出物中剂量组有显著性差异。HCT：与模型组比较,煎出物低剂量组和煎出物高剂量组有显著性差异；煎出物低剂量组与煎出物高剂量组之间无显著性差异。PLT：与模型组比较,煎出物低剂量组和细粉中剂量组有显著性差异；煎出物低剂量组与细粉中剂量组之间无显著性差异。BMNC:与模型组比较,煎出物低剂量组的BMNC有显著性差异。除煎出物高剂量组外BMNC,其余各组各指标较模型组均有升高趋势。5.2醋龟甲水煎出物与细粉对小鼠骨质疏松模型的影响在小鼠骨质疏松实验中,各组小鼠的脾脏系数、卵巢系数、去脂干重、灰重、灰重/去脂干重经One-Way ANOVA分析,组间均有显著性差异,需进一步两两比较。模型组的脾脏系数和卵巢系数均与空白组之间有显著性差异,提示造模成功。同时表明短期实验中维甲酸对小鼠性腺有明显损害。模型组的去脂干重、灰重、灰重/去脂干重与空白组之间均有显著性差异,提示造模成功。灰重：与模型组相比较,细粉中剂量组有显著性差异。灰重/去脂干重：与模型组相比较,煎出物高剂量组和细粉中剂量组有显著性差异。除细粉高剂量组外,其余组与模型组相比较均有升高趋势。在小鼠骨质疏松实验中,各组小鼠的磷、钙、血碱性磷酸酶含量经One-Way ANOVA分析,组间均有显著性差异,需进一步两两比较。模型组的磷、钙、血碱性磷酸酶含量较空白组均显著性降低,提示维甲酸致小鼠骨质疏松模型成功。磷：与模型组相比较,阳性组、煎出物高剂量组、细粉中剂量组有显著性差异；与阳性组相比较,煎出物高剂量组和细粉中剂量组之间无显著性差异；煎出物高剂量组与细粉中剂量组相比较,有显著性差异。钙：与模型组相比较,细粉中剂量组有显著性差异。血碱性磷酸酶：与模型组相比较,煎出物（高、中）、细粉（高、低）剂量组的血碱性磷酸酶有显著性差异；与煎出物中剂量组相比较,煎出物高剂量组和细粉低剂量组有显著性差异；与煎出物高剂量组相比较,细粉高剂量组有显著性差异；与细粉低剂量组相比较,细粉高剂量组有显著性差异。与模型组相比较,各组各指标均有升高趋势。结论1、醋龟甲饮片质量控制标准的研究经鉴定,龟甲均为龟科动物乌龟的腹甲,其浸出物的含量均符合（中国药典2010版一部168龟甲项下）不得少于4.5%的规定。建立了高效液相色谱-蒸发光散射测定醋龟甲中羟脯氨酸含量的方法。完善了醋龟甲饮片的质量控制标准,在2010版中国药典的基础上,增加了醋龟甲饮片的的定性指标钙,以及定量指标钙和羟脯氨酸。醋龟甲饮片中钙及羟脯氨酸含量应分别控制在22.95%～34.42%,1.6%-2.4%范围内。2、醋龟甲免煎颗粒剂制备工艺研究采用等量值法制备浸膏,浸膏的得率应控制在5.8%～8.6%范围内,以钙和羟脯氨酸作为控制浸膏中间体质量的定量指标,浸膏中钙和羟脯氨酸含量应分别控制在4.4%～6.6%,19.0%～28.6%范围内。以可溶性淀粉为稀释剂（用量为干膏的约2倍）,95%乙醇为润湿剂,醋龟甲免煎颗粒成形性较好,颗粒易制得,且颗粒的粒度、水分、溶化性和流动性均符合中国药2010版一部附录IC颗粒剂项下的规定。3、醋龟甲免煎颗粒剂的质量控制标准的研究以钙的鉴定作为醋龟甲免煎颗粒剂的鉴别方法,并以钙和羟脯氨酸作为定量指标,制定了醋龟甲免煎颗粒剂的质量控制标准。每袋含钙及羟脯氨酸量应分别在12.4～18.60mg,10.8～16.3mg范围内。4、醋龟甲免煎颗粒剂制备工艺的药效学评价醋龟甲对环磷酰胺所致小鼠血虚及维甲酸致小鼠骨质疏松有治疗作用,且细粉组与水煎出物组之间的药效无显著性差异,表明以水煎出物为原料制备醋龟甲免煎颗粒剂的工艺符合临床的应用。同时,研究提示大剂量醋龟甲细粉可能影响血虚小鼠及骨质疏松小鼠的胃肠功能或其它系统的功能,一定程度上减弱其药效。为了减小患者的服用量,提高患者的顺应性,宜采用水煎出物制备醋龟甲免煎颗粒剂。
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相关论文文献
- [1].借鉴名著有效方[J]. 健康生活 2018(09)
- [2].醋龟甲不同剂型对血虚或骨质疏松小鼠的防治作用比较[J]. 中国药房 2017(19)