论文题目: 大豆皮过氧化物酶的分离纯化研究
论文类型: 硕士论文
论文专业: 生物物理学
作者: 严群
导师: 张建国
关键词: 大豆皮过氧化物酶,纯化,热稳定性,酸碱稳定性
文献来源: 浙江大学
发表年度: 2005
论文摘要: 过氧化物酶[Peroxidase,POD,EC1.11.1.7（x）]是一类以血红素为辅基的酶,在生物中广泛存在,具有多种不同的生物功能,主要催化H2O2和有机过氧化物对多种有机物和无机物的氧化作用。它在蛋白质、多肽、激素、病毒、寄生虫、生物降解及神经系统等方面都有应用,具有特异性强,灵敏度高等优点。 迄今被研究最深入的应首推辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）,此酶已经作为一种商品化试剂广泛用于生物学研究并成为重要的诊断试剂。与HRP同属于植物过氧化物酶超家族的III类酶大豆皮过氧化物酶（soybeanhull peroxidase,SHP,EC1.11.1.7）,是从大豆加工副产品豆皮或豆荚中提取的一类具有很高活性的过氧化物酶。SHP是一种由单一肽链与卟啉（protoporphyrin Ix）构成的血红素蛋白,脱辅基蛋白分子须与血红素结合才构成全酶。其分子量约为37kD,由300多个氨基酸残基组成,其等电点为3.9,属于酸性蛋白质。 本文对大豆皮过氧化物酶进行了提纯,采用低浓度中性磷酸盐缓冲液抽提。纯化过程采用了硫酸铵分级沉淀、丙酮分级沉淀、DEAE Sepharose Flast Flow离子交换层析、Sephhadex G-75凝胶层析等技术,比较并摸索出提取和纯化的合适方法和条件。最后得到的过氧化物酶样品纯化了33.7倍,回收率为46.1%。同时分析了酶的热稳定性和酸碱稳定性,结果表明,大豆皮过氧化物酶的热稳定性和酸碱稳定性都很高,这些特性正好弥补了HRP的不足,使SHP能够代替HRP应用于更广阔的领域内,且大豆皮来源广又便宜,所以大豆皮过氧化物酶的产业化和应用前景非常乐观。
论文目录:
摘要
Abstract
第一篇：论文综述部分
大豆皮过氧化物酶的结构、分离纯化及应用研究
1、过氧化物酶简介
2、大豆皮应用、优势
3、大豆皮过氧化物酶的化学结构
3.1 大豆皮过氧化物酶一级结构
3.2 大豆皮过氧化物酶高级结构
3.3 大豆皮过氧化物酶结构特性与功能关系
4、大豆皮过氧化物酶分离、纯化和鉴定
4.1 酶的抽提
4.2 用于分离纯化的沉淀技术
4.3 离子交换层析
4.4 凝胶过滤
4.5 其他层析技术
4.6 大豆皮过氧化物酶的鉴定
5.大豆皮过氧化物酶的应用
5.1 生物传感器
5.2 环保方面的应用
5.3 食品添加剂
5.4酶联免疫分析
参考文献
第二篇：论文实验部分
大豆皮过氧化物酶的分离纯化研究
前言
1、仪器和试剂
1.1 植物材料
1.2 主要仪器及设备
1.3 主要试剂
1.4 缓冲液配制
1.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳工作液
2、实验方法
2.1 SHP活性检测方法
2.2 SHP纯度和蛋白质浓度的测量
2.3 酶原液的提取
2.4 盐析及丙酮沉淀
2.5 DEAE Sepharose Flast Flow离子交换柱层析分离
2.6 Sephadex G-75凝胶层析分离
2.7 酶液的浓缩
2.8 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
2.9 SHP的热稳定性和酸碱稳定性
3、实验结果与讨论
3.1 提取酶原液的最适条件
3.2 硫酸铵及丙酮沉淀
3.3 DEAE Sepharose Flast Flow离子交换柱层析
3.4 Sephadex G-75凝胶层析分离
3.5 SHP的纯化和纯度鉴定
3.6 热稳定性
3.7 酸碱稳定性
4、结论与展望
4.1 结论
4.2 展望
参考文献
附录：缩略词对照表
致谢
发布时间: 2005-10-10
参考文献
- [1].大豆过氧化物酶的酶学特性与应用研究[D]. 徐芝勇.浙江大学2006
- [2].大豆皮过氧化物酶提取、分离、纯化及其固定化研究[D]. 高晶晶.西北大学2011
- [3].小麦籽粒过氧化物酶（WP1）的纯化及性质研究[D]. 赵金阳.西北农林科技大学2009
- [4].川贝母多倍体诱导及其过氧化物酶同功酶的分析[D]. 王强.四川大学2003
- [5].大豆过氧化物酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达[D]. 袁红霞.西北师范大学2010
- [6].小麦过氧化物酶（WP1）在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定[D]. 罗海霞.西北农林科技大学2009
- [7].山融3号小麦耐盐相关过氧化物酶基因及植物抗砷基因工程初步研究[D]. 王乐.山东大学2009
- [8].水稻成熟胚高频再生体系的建立及其生理生化特性的研究[D]. 张宗琼.广西大学2004
- [9].玉米叶片细胞壁过氧化物酶在ABA信号转导中的作用[D]. 苏凤侠.南京农业大学2009
- [10].马铃薯种质资源的分子标记鉴定研究[D]. 王芳.云南师范大学2007
相关论文
- [1].酶法制备豆皮低聚糖[D]. 任庆荣.暨南大学2007
- [2].盐胁迫对小麦过氧化物酶活性影响的机理研究[D]. 孙静.山东农业大学2006
- [3].乳过氧化物酶的分离纯化及其在冷却猪肉保鲜中的应用[D]. 肖岚.四川农业大学2007
- [4].莲藕过氧化物酶的分离纯化、性质研究及固定化初探[D]. 阙瑞琦.西南大学2008
- [5].菊芋叶片过氧化物酶的分离纯化及固定化研究[D]. 胡丽莲.广西师范大学2006
- [6].一种具有酪氨酸交联活性的小麦种子过氧化物酶的分离纯化及性质研究[D]. 罗龙海.西北农林科技大学2007
- [7].大豆过氧化物酶的酶学特性与应用研究[D]. 徐芝勇.浙江大学2006
- [8].植物（大葱）谷胱甘肽过氧化物酶分离纯化的探索[D]. 朱继玲.西南农业大学2005
- [9].马来酸水合酶的分离纯化及其性质研究[D]. 章云.南京工业大学2005
- [10].金属螯合亲和配基制备及其在分离豆壳过氧化物酶中的应用[D]. 文禹撷.浙江大学2003
标签：大豆皮过氧化物酶论文; 纯化论文; 热稳定性论文; 酸碱稳定性论文;