COPD模型大鼠骨骼肌细胞凋亡及JNK、p38表达的实验研究

论文摘要

目的：观察JNK. p38MAPK信号传导通路对COPD模型大鼠骨骼肌细胞凋亡的影响。方法：100只健康10周龄Wistar大鼠随机分为模型组80只,对照组20只。模型组采用第1-29天,第31-60天熏香烟,第30天气管内注入猪胰弹性蛋白酶（PEE）的方法建立COPD大鼠模型。对照组不熏香烟,在模型组气管内注入PEE的同一天采用同—术式气管内注入等量生理盐水。继续饲养至第90天,以低于对照组大鼠平均体重的90%作为判断发生营养不良的标准,将实验大鼠分为：对照组、COPD营养正常组和COPD营养不良组。取大鼠膈肌、趾长伸肌制备石蜡切片,分别采用TUNEL法测定膈肌、趾长伸肌石蜡切片细胞凋亡率和免疫组织化学法测定JNK、p38的表达,Nikon Eclipse 80i显微镜图像系统测定免疫组化表达强度,所得数据经SPSS 17.0软件进行单因素方差分析、t检验及相关性分析。结果：1.COPD模型大鼠营养不良组膈肌、趾长伸肌的凋亡率均显著高于对照组（P<0.01, P<0.01）、COPD模型大鼠营养正常组（P<0.01,P<0.01）。三组大鼠膈肌凋亡率与趾（?）凋亡率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。2. JNK、p38在对（?）趾长伸肌中的表达均弱于在COPD模型大鼠营养正常组（P<0.01,P 0.01）、COPD模型大鼠营养不良组趾长伸肌中的表达（P<0.01, P<0.01）; JNK、p38在COPD模型大鼠营养不良组膈肌中的表达均强于在COPD模型大鼠营养正常组（P<0.01,P<0.01）、对照组（P<0.01,P<0.01）中的表达。JNK、p38在三组大鼠膈肌中的表达与在趾长伸肌中的表达比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论：1.成功复制出COPD大鼠模型。2.骨骼肌细胞凋亡可能是COPD模型大鼠骨骼肌萎缩的机制之一。3. JNK、p38可能参与COPD模型大鼠骨骼肌细胞凋亡的发生。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 本文主要的英汉缩略语词名对照表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 主要试剂及耗材
• 2.1.3 主要仪器
• 2.1.4 主要实验溶液的配制
• 2.2 方法
• 2.2.1 实验大鼠分组、编号、饲养
• 2.2.2 慢性阻塞性肺疾病大鼠模型的构建
• 2.2.3 判断COPD模型组大鼠营养不良的标准
• 2.2.4 第90天大鼠分组
• 2.2.5 肺功能的测定、处死大鼠、标本的处理
• 2.2.6 肺组织EH染色后在显微镜下观察病理学变化
• 2.2.7 骨骼肌组织HE染色后在显微镜下观察病理学变化
• 2.2.8 TUNEL原位杂交实验
• 2.2.9 JNK蛋白表达检测
• 2.2.10 p38蛋白表达检测
• 2.2.11 图象采集
• 2.2.12 数据处理和统计学分析
• 第三章 结果
• 3.1 模型评价
• 3.1.1 大鼠一般情况
• 3.1.2 大鼠肺组织、气道病理改变
• 3.1.3 肺功能
• 3.1.4 大鼠体重变化
• 3.2 趾长伸肌重量变化
• 3.3 骨骼肌病理变化
• 3.4 趾长伸肌、膈肌细胞凋亡率测定
• 3.4.1 各组大鼠趾长伸肌、膈肌细胞凋亡率
• 3.4.2 趾长伸肌细胞凋亡率与大鼠体重相关性分析
• 3.4.3 趾长伸肌细胞凋亡率与趾长伸肌重量的相关性分析
• 3.5 JNK、p38表达
• 3.5.1 JNK在组织切片上的表达
• 3.5.2 p38表达
• 3.5.3 趾长伸肌细胞凋亡率与JNK、p38的相关性
• 附图一 实验大鼠肺组织病理学图片
• 附图二 实验大鼠骨骼肌病理图片
• 附图三 实验大鼠骨骼肌凋亡图片
• 附图四 免疫组化图片
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的论文