E-选择素、巨噬细胞炎症蛋白-2在慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症中的作用

论文摘要

目的：制备慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型，探讨E-选择素、巨噬细胞炎症蛋白-2（MIP-2）在COPD气道炎症中的作用。方法：SD大鼠24只随机分为正常对照阻（对照组，12只）、烟雾暴露组（COPD组，12只）。COPD组每天上下午两次在自制烟雾暴露箱内被动吸烟，每周6天，持续80天。对照组除烟雾暴露外，其他饲养条件等同。制模完成后，行肺功能测定，分别测定FEV0.3、FEV0.3／FVC％、PEF。抽取下腔静脉血后处死大鼠，左肺组织行支气管肺泡灌洗，支气管肺泡灌洗液（BALF）行白细胞计数和分类，右中上肺组织保存于-70℃冰箱待用，右下肺组织于10％中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片，HE染色。肺组织切片观察肺组织病理变化，分别测定肺平均内衬间隔（MLI）、平均肺泡数（MAN）。然后采用免疫组化方法检测两组大鼠肺组织匀浆中E-选择素的表达，ELISA方法检测血清、BALF、肺组织匀浆中MIP-2的含量。结果：（1）肺功能检测示COPD组大鼠FEV0.3（ml）、FEV0.3／FVC（％）及PEF（ml／s）均低于对照组，差别有统计学意义（P均＜0.05），说明存在明显气流受限、阻塞性肺通气功能障碍。（2）病理学观察COPD组大鼠肺组织病理改变符合COPD病理改变；肺气肿形态学定量分析结果显示COPD组的MLI高于对照组，MAN低于对照组，差别均有统计学意义（P均＜0.05）；COPD组BALF中白细胞总数、巨噬细胞数、中性粒细胞数均高于对照组，差别有统计学意义（P均＜0.05），且中性粒细胞百分比显著高于对照组（P＜0.05）。（3）COPD组大鼠支气管肺组织血管内皮细胞E-选择素蛋白的表达较对照组增高，差别有统计学意义（P＜0.05），且与BALF中的中性粒细胞数呈正相关（r=0.809，P＜0.01）。（4）COPD组大鼠BALF及肺组织MIP-2含量均高于对照组，差别有统计学意义（P均＜0.05），且均与BALF中的中性粒细胞数呈正相关（r1=0.893，P1＜0.01；r2=0.716，P2＜0.05）。结论：（1）采用单纯被动吸烟可以成功复制出COPD大鼠模型。（2）COPD大鼠模型中E-选择素在支气管肺组织血管内皮细胞的表达明显增高，MIP-2在BALF及肺组织匀浆含量显著增高，且均与BALF中的中性粒细胞数呈正相关。（3）E-选择素和MIP-2可能参与了COPD气道炎症过程，在中性粒细胞跨越血管内皮向气道移行的过程中发挥了作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 动物分组及处理
• 2.2.1.1 分组及COPD模型建立
• 2.2.1.2 一般情况
• 2.2.1.3 大鼠肺功能测定
• 2.2.1.4 支气管肺泡灌洗液（BALF）收集及白细胞计数和分类计数
• 2.2.1.5 肺组织病理学检查及肺气肿程度的判断
• 2.2.2 指标检测
• 2.2.2.1 用免疫组化方法检测各组大鼠肺组织E-选择素的表达
• 2.2.2.2 用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清、BALF和肺组织匀浆MIP-2的含
• 2.2.3 统计学处理
• 第三章 结果
• 3.1 一般情况观察
• 3.2 体重测定
• 3.3 肺功能测定
• 3.4 光镜下大鼠肺及支气管组织的病理学观察和肺气肿形态学定量分析
• 3.4.1 病理形态学大体和光镜观察
• 3.4.2 肺气肿形态学定量分析
• 3.5 支气管肺泡灌洗液细胞计数和分类计数
• 3.6 大鼠肺组织中E-选择素的表达
• 3.7 血清、BALF和肺组织匀浆中MIP-2的含量
• 3.8 COPD组支气管肺组织E-选择素的表达和BALF、肺组织匀浆中MIP-2的含量与BALF中性粒细胞数的关系
• 第四章 讨论
• 4.1 COPD模型的建立
• 4.2 E-选择素、MIP-2在COPD气道炎症中的作用
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间主要研究成果