论文摘要
目的 简化人头皮毛乳头的分离方法,实现毛乳头细胞的体外扩增;利用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠（alginate-polylysine-alginate,APA）微囊,将扩增的毛乳头细胞包裹其中,实现毛乳头的体外重建;从形态学及膜通透性等方面与毛乳头进行对比,观察其诱导毛囊再生的能力,并寻求最佳的人工毛乳头直径。方法 1.将含有毛球部的皮下组织剪成肉泥状,胶原酶Ⅰ消化2-3小时后,加入10倍体积的DMEM,用移液枪在显微镜下收集毛乳头; 2.利用高压电场微囊发生器,以APA微囊包裹分离培养的毛乳头细胞;利用普通光学显微镜、倒置相差显微镜、透射电镜观察对比新鲜分离的毛乳头与毛乳头细胞微囊（人工毛乳头）的大体形态和超微结构;将毛乳头细胞微囊移植至鼠耳皮下,6周后取材行组织学检查。 3.在共聚焦显微镜下,观察分子量分别为10ku、40ku、70ku的葡聚糖-荧光素在APA微囊中扩散的方式及速度;对比不同直径的APA微囊中葡聚糖-荧光素的强度;对比APA微囊膜与新鲜分离的毛乳头基膜的通透性,寻求最佳的人工毛乳头直径。结果 1.改良一步酶消化法的贴壁率达到99%,较原一步酶消化法明显提高提高,分离毛乳头所需的操作时间进一步缩短,劳动强度降低; 2.毛乳头细胞微囊与新鲜分离的人头皮毛乳头在大体形态及超微结构方面非常相似,组织切片HE染色显示毛乳头细胞微囊经体外培养4周,囊中的毛乳头可重新聚集成团并分泌细胞外基质,形成“类毛乳头样”结构;毛乳头细胞微囊移植至鼠耳6周后,组织学检查观察到皮下形成密集的同心圆状毛囊结构,其数量、大小、分化程度等方面与正常对照明显不同。 3.荧光素在APA微囊中呈同心圆状、逐层渗透的方式向内扩散,分子量的大小与其通透性成反比;相同分子量、相同时间内荧光强度比较:小囊组>中囊组>大囊组,大囊组、小囊组间比较有显著差异（P<0.01）,大囊组与中囊组间比较有统计学意义（P<0.05）;直径400μm的微囊中的荧光强度高于新鲜分离的毛乳头中的荧光强度（P<0.05）。
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