人VEGF165对肝硬化大鼠半肝切除术后余肝再生能力的影响

论文摘要

目的：观察外源性人血管内皮生长因子165（hVEGF165）对肝硬化大鼠肝部分切除术后余肝再生及肝功能恢复的影响。方法：采用基因重组技术构建hVEGF165慢病毒表达载体，通过Real time PCR法测定病毒滴度；携带hVEGF165基因的慢病毒载体体外转染BLR3A大鼠肝细胞72h后，利用RT-PCR与Western blot法检测细胞中hVEGF165mRNA及蛋白的表达；传统CCl4诱导法构建大鼠肝硬化模型，肝穿刺病理学检查法鉴定模型；126只肝硬化大鼠行50%肝切除术后随机分为3组，A组（VEGF165组）：门静脉注射hVEGF165慢病表达毒载体；B组（空病毒组）：门静脉注射空慢病毒载体；C组（对照组）：门静脉注射PBS缓冲液。分别于术前、术后12h、24h、72h、7d、14d及28d检测各组大鼠余肝组织hVEGF165mRNA与蛋白的表达、肝再生率、PCNA阳性表达率及门静脉血液中ALT与AST含量。结果：成功构建了表达hVEGF165的慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO-hVEGF165，测得病毒滴度为：1.18×107v.p./mL。重组慢病毒表达载体转染BLR3A大鼠肝细胞72h后，荧光蛋白表达率超过80%，RT-PCR与Western blot法测得转染组hVEGF165mRNA及VEGF165蛋白表达阳性，而阴性对照组及空白对照组表达阴性；肝硬化大鼠模型制模成型率为96.18%；VEGF165组术后72h至术后28d肝再生率分别为34.98±6.22%、62.19±1.81%、83.54±4.50%、92.23±4.41%，术后24h至术后28d PCNA阳性表达率分别为18.05±0.92%、42.89±5.52%、35.56±3.86%、26.37±1.35%、19.48±2.70%均显著高于对照组（P<0.01）；术后72h至术后28d血清ALT含量分别为258.14±12.94U/L、215.67±22.12U/L、175.92±8.78U/L、133.26±13.92U/L，血清AST含量分别为553.34±14.10U/L、481.37±14.74U/L、425.95±5.04U/L、388.29±15.99U/L均较对照组明显下降（P<0.01）。结论：外源性hVEGF165可促进肝硬化大鼠肝部分切除术后余肝的再生及肝功能的恢复。

论文目录

中英文缩略词对照表

摘要

ABSTRACT

前言

1. 正常肝脏再生能力

2. 肝硬化肝脏再生能力受损及其机制

3. VEGF165在肝硬化肝脏再生研究领域中的应用

材料与方法

1. 主要试剂与仪器

2. 方法

3. 评价指标

4. 统计学方法

5. 技术路线

结果

1. 目的基因合成酶切电泳检测及测序

2. 酶切鉴定及质粒测序

3. pLenti6/V5-D-TOPO-VEGF165 转染 293T 细胞

4. Real time PCR 法测慢病毒滴度

5. pLenti6/V5-D-TOPO-VEGF165 转染大鼠肝细胞

6. VEGF165 基因在 BLR 3A 大鼠肝细胞中的表达检测

7. 肝硬化模型制备

8. 大鼠术后 28 天肝体积恢复情况

9. 肝再生率

10. 大鼠术后余肝组织中人 VEGF165 mRNA 及蛋白的表达

11. PCNA 阳性表达率

12. 大鼠肝功能检测

讨论

1. 肝硬化大鼠模型的构建

2.VEGF165 慢病毒表达载体的构建及其在大鼠肝脏中的表达

3. VEGF165 慢病毒表达载体对肝硬化大鼠肝部分切除术后余肝再生的影响

4. 总结与展望

小结

致谢

参考文献

综述

参考文献

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标签：人血管内皮生长因子论文; 慢病毒载体论文; 肝再生论文; 肝硬化论文; 半肝切除术论文;

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