神经肽Cortistatin在移植免疫中作用的研究

论文摘要

获得移植免疫耐受是器官移植治疗的终极目标。CD4+CD25+调节T细胞对获得并维持对自身抗原或同种异体移植抗原的免疫耐受至关重要。增强CD4+CD25+调节T细胞的功能可防止自身免疫性疾病及移植排斥反应的发生。转录因子Foxp3主要表达在CD4+CD25+调节T细胞,作为CD4+CD25+调节T细胞的分子标志,可对其发育及功能进行调控。FK506及环孢素A等传统免疫抑制药物虽然可以有效抑制同种异体免疫反应,但长期使用此类药物可能导致严重的副作用,包括抑制调节T细胞的产生及其功能。因此,有必要探索、研发副作用较少的免疫抑制药物。近期已经有应用神经肽在自身免疫性疾病及骨髓移植中诱导免疫耐受的研究报道。CST是一种生长抑素相关的环形神经肽。作为一种生长抑素类似物,CST可以与所有5种SSTR结合,且其受体亲和力与SS相当。CST不但可以与SSTR结合,还可以与MrgX2及GHSR结合。人类的各种免疫细胞表达CST,而没有SS的表达,且其表达水平与免疫细胞的分化与激活状态有关。因此CST可能是一种免疫系统重要的内源调节因子。CST可抑制一些自身免疫性疾病,如:IBD、CIA的发生与发展。自身免疫性疾病及免疫排斥反应的发病机制有相似的分子及细胞基础,但目前还缺少关于CST对移植免疫影响的研究。因此我们用同种异体皮肤移植模型来研究CST对移植免疫的影响。我们同时比较了CST与生长抑素类似物奥曲肽对移植免疫影响的差异。目的:CST具有抗炎功能,对一些动物模型的自身免疫性疾病的发生发展具有抑制作用。因缺少CST对移植免疫影响的相关研究,我们在此实验中应用皮肤移植模型及混合淋巴细胞培养检测CST对同种异体移植免疫的影响并对其机制进行探讨。方法:皮肤移植模型中由C57BL/6（B6）（H-2Kb）小鼠供皮,移植给BALB/c（H-2Kd）受体小鼠。移植后即予CST或奥曲肽（SMS）腹腔注射,并连续注射7天。剂量分为0.02mg/kg,0.2mg/kg,2mg/kg三组。以腹腔注射PBS组为对照。皮肤移植物的存活时间被记录。应用混合淋巴细胞培养检测CST与奥曲肽对T细胞增殖的影响,同时应用酶联免疫分析（ELISA）检测其对T细胞分泌细胞因子的影响。应用流式细胞术检测CST与奥曲肽对T细胞膜表面分子CD4及CD25表达的影响,同时应用RT-PCR技术检测其对T细胞Foxp3基因表达的影响,以判定其对同种异体移植免疫中CD4+CD25+调节T细胞生成的影响。结果:连续7日腹腔注射CST,0.2mg/kg或2mg/kg,可有效延长BALB/c受体皮片移植物存活时间,中位生存时间可分别达13天及14天,而0.02mg/kg组及对照组中位生存时间仪为7天,组间差别有显著意义;腹腔注射奥曲肽,三种剂量组对免疫排斥反应均无显著保护作用,中位生存时间分别为7天、8天、8天,与对照组组间差别无显著意义。CST与奥曲肽均可以抑制混合淋巴细胞培养中T细胞的增殖反应,同时可降低细胞培养上清中IFN-γ的浓度,而增加IL-10的浓度,与应用PBS的对照组相比,差别有显著意义。与奥曲肽相比,CST对混合淋巴细胞培养中T细胞的增殖具有更强的抑制作用,同时可更显著诱导IL-10浓度升高。流式细胞检测显示应用CST治疗（0.2mg/kg或2mg/kg）,可使移植受体脾细胞中CD4+CD25+T在CD4+T中所占比例增至对照组两倍多,分别达到6.7%及5.4%,与对照组（2.5%）差别有显著意义;应用奥曲肽治疗可使移植受体脾细胞中CD4+CD25+T在CD4+T中所占比例略有下降,与对照组相比差别无显著意义。RT-PCR检测显示应用CST治疗（0.2mg/kg或2mg/kg）,可使移植受体T细胞Foxp3基因表达水平显著升高,而应用奥曲肽治疗治疗,可使移植受体T细胞Foxp3基因表达水平轻度下降。结论:我们的研究显示,作为内源性免疫调节因子,CST可抑制T细胞增殖,诱导产生抑制性细胞因子IL-10;在移植免疫中应用CST治疗可诱导移植免疫低反应,有效延长移植物存活时间,同时可诱导产生CD4+CD25+Foxp3hi曲调节T细胞。应用CST治疗可能成为控制免疫排斥反应,诱导免疫耐受的新方法。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 实验一 CST对MLC中T细胞增殖及分化的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二 CST对移植物存活时间及调节T细胞的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附录
• 个人简历和研究成果
• 致谢