雌激素和孕激素对体外培养奶牛破骨细胞增殖分化的影响

论文摘要

目的：观察不同浓度雌激素、孕激素对体外培养的破骨细胞增殖分化的影响。方法：无菌取出新生奶牛的股骨用机械分离酶消化结合法获取破骨细胞，进行培养，通过形态学观察、Giemsa染色、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色鉴定后作为试验模型，将用含10％胎牛血清的DMEM培养液配制的不同浓度的雌激素、孕激素与破骨细胞共同培养，采用MTT法观察雌激素、孕激素对破骨细胞增殖功能的影响（用波长450处OD值表示）及奶牛破骨细胞的生长曲线，用抗酒石酸酸性磷酸酶测试盒测定雌激素、孕激素对破骨细胞分化的影响（用抗酒石酸酸性磷酸酶活性表示）。结果：采用机械分离酶消化结合法获得的细胞具有典型破骨细胞的形态特征，细胞经抗酒石酸酸性磷酸酶染色呈阳性且阳性率达92％，Giemsa染色有空泡显示，符合破骨细胞的生物学特性，表明培养的细胞为高纯度的破骨细胞。加雌激素、孕激素培养后测定细胞增殖结果显示：不同浓度的雌激素、孕激素均能抑制破骨细胞的增殖。在10-9mol／L-10-5mol／L雌激素、孕激素浓度范围内的抑制作用呈现剂量-效应关系，与对照组相比，10-9mol／L-10-8mol／L雌激素试验组可抑制破骨细胞破骨细胞增殖，但与对照组差异不显著（P＞0.05），10-7mol／L-10-5mol／L雌激素试验组与对照组比较均有极显著性差异（P＜0.01），以10-7mol／L试验组最为显著（P＜0.01）；10-9mol／L-0-7mol／L孕激素试验组可抑制破骨细胞增殖，但与对照组差异不显著（P＞0.05），10-6mol／L-10-5mol／L孕激素试验组与对照组比较均有极显著性差异（P＜0.01），以10-6mol／L试验组最为显著（P＜0.01）；10-9mol／L-10-5mol／L雌激素和孕激素混合组与对照组相比，10-9mol／L-10-8mol／L雌激素、孕激素混合试验组差异不显著（P＞0.05），10-7mol／L-10-5mol／L雌激素、孕激素混合试验组与对照组比较均有极显著性差异（P＜0.01），以10-7mol几试验组最为显著（P＜0.01）；结果显示孕激素对雌激素有协同促进作用。雌激素、孕激素对奶牛破骨细胞的抑制增殖作用还存在时间-效应关系，随着时间的延长，吸光度值下降，至第7d，吸光度值最低，到第8d，吸光度值有所上升。不同浓度的雌激素、孕激素均能抑制破骨细胞的分化，但与对照组比较差异不明显（P＞0.05）。结论：雌激素、孕激素能抑制体外培养的破骨细胞增殖，且存在剂量-效应和时间-效应关系；孕激素对雌激素有协同促进作用；雌激素、孕激素均能抑制破骨细胞分化。雌激素、孕激素通过抑制体外培养的破骨细胞增殖及分化，从而抑制骨吸收。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略语
• 文献综述
• 1 破骨细胞及其骨吸收调控研究概况
• 1.1 概述
• 1.2 破骨细胞的形态、结构及功能
• 1.3 破骨细胞培养方法
• 1.4 破骨细胞鉴定与观察
• 1.5 破骨细胞的应用前景描述
• 1.6 骨吸收及其调节因子
• 2 激素对骨代谢影响的研究概况
• 2.1 雌激素对骨代谢影响的研究概况
• 2.2 孕激素对骨代谢影响的研究概况
• 2.3 雌激素和孕激素合用对骨代谢影响的研究概况
• 目的和意义
• 材料与方法
• 1 试验动物
• 2 试验试剂及配制
• 3 器材的处理
• 4 试剂仪器和设备
• 5 破骨细胞的培养
• 6 破骨细胞的鉴定
• 6.1 一般形态学观察
• 6.2 GIEMSA染色
• 6.3 抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色
• 7 观察指标
• 7.1 破骨细胞生长曲线的测定
• 7.2 雌激素，孕激素对破骨细胞增殖的影响
• 7.3 雌激素，孕激素对破骨细胞分化的影响
• 结果
• 1 活细胞观察以及GIEMSA染色和抗酒石酸酸性磷酸酶染色定性
• 1.1 一般形态观察
• 1.2 GIEMSA染色初步定性
• 1.3 抗酒石酸酸性磷酸酶染色定性
• 2 破骨细胞生长曲线测定
• 3 对破骨细胞增殖的影响
• 3.1 雌激素对破骨细胞增殖的影响
• 3.2 孕激素对破骨细胞增殖的影响
• 3.3 雌激素和孕激素混合试验组对破骨细胞增殖的影响
• 4 对破骨细胞分化的影响（对破骨细胞TRAP活性表达的影响）
• 讨论
• 1 关于破骨细胞体外培养和试验方法中的几个问题
• 1.1 关于破骨细胞体外培养试验
• 1.2 关于破骨细胞培养方法
• 1.3 细胞的鉴定
• 1.4 MTT法检测细胞增殖原理和意义
• 2 雌激素和孕激素对骨代谢作用机理的探讨
• 2.1 雌激素和孕激素对体外培养破骨细胞增殖的影响
• 2.2 雌激素和孕激素对体外培养破骨细胞分化的影响
• 结论
• 参考文献
• 致谢