论文摘要
老年性痴呆症亦称阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD),是一种以记忆减退,认知障碍,人格改变为特征的神经退行性疾病。AD是老年人群中进行性痴呆的最主要原因,随着人口老龄化,老年痴呆症的危害性日益严重。该病病因仍不十分清楚,目前多数学者认为中枢胆碱能系统功能损伤是造成AD病人认知记忆障碍的重要因素。目前,临床上尚无满意的治疗药物,因此,探索AD的病因,寻找治疗AD的有效药物是当务之需。本组在研究中药治疗老年性痴呆时,发现长苞凹舌兰[Coeloglossum. viride (L.) Hartm. Var. bracteatum (Willd.) Richter,藏名旺拉]提取物CE,可以改善多种拟痴呆小鼠、大鼠的学习记忆障碍。本实验采用立体定位技术将鹅蒿蕈氨酸(IBO)(2μl, 8μg/μl)单侧注射入Meynert基底核(nbM)建立胆碱能损伤致痴呆大鼠模型,用Morris水迷宫实验和跳台实验测试大鼠的学习记忆能力,以观察不同胆碱能系统损伤对动物的学习记忆能力的影响,以及CE对学习记忆功能障碍的改善作用。为进一步探讨CE的作用机制,同时观察了CE对IBO诱导痴呆大鼠右侧胆碱能系统相关的脑区:皮层、海马和纹状体的乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AChE)、胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase, ChAT)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和NGF受体酪氨酸激酶(tyrosine kinase, TrkA)的表达。雄性SD大鼠随机分为4组,即正常对照组,左侧损伤组,右侧损伤组,右侧损伤+给药组(5mg/kg),手术前1小时灌胃给药,术后每日给药一次,直至行为学测试结束。Morris水迷宫实验结果提示:将IBO注射进入单侧nbM,可以造成大鼠的空间学习和记忆功能障碍,大鼠表现出明显的拟痴呆的症状。这说明模型制作成功。单侧损伤大鼠nbM对其空间学习记忆的影响不同,并且右侧损伤组的空间学习记忆能力障碍更为严重。给予CE,右侧损伤+给药组的大鼠找到平台的时间明显缩短,说明CE明显的提高了nbM右侧损伤的大鼠空间学习和记忆能力,对其拟痴呆症状具有明显的改善作用。跳台实验结果显示:与正常对照组相比,左侧损伤组和右侧损伤组的大鼠3分钟内跳下平台的潜伏期都有缩短,说明其记忆能力受损,但无统计学上的差异,可能和动物的回避反应的个体差异较大有关。与损伤组相比,给予CE,右侧损伤+给药组的潜伏期有延长,显示出CE对记忆能力障碍的改善作用。说明在记忆的保留上,CE在右侧胆碱能系统损伤模型上表现出一定的保护作用。利用western blotting技术检测大鼠右侧胆碱能系统不同脑区的蛋白含量,结果如下表。以每次实验中每组的内对照β-actin条带的密度校准每个条带的密度。再以正常对照组的校准密度值计为100%,其余各组以正常对照组校准密度值的百分率表示。目的蛋白表达量(% of control)=各组校准条带密度/正常对照组校准条带密度×100%。综合以上结果,我们得出结论:(1)IBO损伤大鼠左侧或者右侧的基底前脑meynert核,都能造成其学习记忆能力障碍。这种学习记忆能力障碍可能是由于nbM损伤造成的胆碱能系统的病理性改变所引起。模型大鼠的海马内AChE的含量过高造成其中乙酰胆碱水平下降可能是大鼠学习记忆能力减退的主要原因之一。(2)CE对nbM损伤造成的动物的学习记忆功能障碍有改善作用;对nbM损伤造成的相关蛋白表达异常有改善作用,其作用机制可能是通过抑制病理状态下中隔胆碱能神经元AChE的过度表达,使其纤维投射区海马内AChE恢复正常,从而提高中枢胆碱能系统的功能。
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