低氧、急性低氧运动后不同恢复环境对骨骼肌NO/NOS的影响

论文摘要

1研究目的研究单纯低氧暴露和一次性低氧运动后常氧与低氧两种恢复环境下大鼠腓肠肌NO浓度、总NOS(TNOS)活性和nNOS蛋白和基因表达的变化。2研究方法以雄性SD大鼠为研究对象,分别进行单纯低氧暴露实验和一次性低氧运动后不同恢复环境实验;取腓肠肌为实验标本。单纯低氧暴露实验在低氧暴露第1天、2天、4天、7天取材。一次性低氧运动实验在运动完成后把大鼠处于低氧、常氧两种不同的环境下进行恢复,运动后即刻、恢复1天、2天、7天取材。试剂盒检测腓肠肌NO浓度及TNOS活性;Western blot检测nNOS蛋白的含量;实时荧光定量RT—PCR检测nNOS基因表达。3研究结果3.1单纯低氧暴露实验中NO浓度和TNOS活性都没有显著性变化,但都在1天、2天轻微下降,随后升高。低氧1天、2天nNOS蛋白含量下降,但无显著性差异,至低氧4天显著升高,低氧7天仍维持在较高水平。nNOS基因表达低氧1天、2天稍有增高,至4天非常显著升高,7天继续升高。3.2一次性低氧运动后不同恢复环境实验中NO的浓度在低氧运动后即刻下降,之后逐渐恢复;低氧恢复NO浓度稍高于安静对照组;常氧恢复NO浓度高于低氧恢复,且在恢复第7天二者有显著性差异。腓肠肌TNOS活性在一次性低氧运动后稍有升高;恢复1天、2天继续升高,7天又下降。运动后即刻nNOS蛋白含量即升高;在恢复过程中继续升高,随后有所下降;常氧恢复1天、2天显著高于常氧对照组;低氧恢复各组均显著高于常氧对照组。一次性低氧运动后即刻,nNOS基因表达即升高;恢复过程中,常氧恢复环境下降,但仍比常氧对照组高;低氧恢复环境下nNOS表达继续升高,在恢复2天时达到峰值,各组与常氧对照组均有显著性差异。恢复2天、7天,nNOS基因表达低氧恢复显著高于常氧恢复。4结论(1)单纯低氧暴露上调nNOS蛋白与基因表达。(2)一次性低氧运动降低NO的生成,对TNOS活性没有明显影响,可诱导nNOS蛋白与基因表达水平升高。(3)恢复过程中,NO浓度常氧恢复高于低氧恢复,TNOS活性低氧恢复和常氧恢复没有明显差异,而nNOS的蛋白含量和基因表达都是低氧恢复高于常氧恢复。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语中英文对照表
• 1 前言
• 2 文献综述
• 2.1 NO的生理功能
• 2.1.1 NO在肌肉/运动系统的作用
• 2.1.1.1 NO与骨骼肌血流量
• 2.1.1.2 一氧化氮与骨骼肌的氧消耗和线粒体呼吸
• 2.1.1.3 NO与骨骼肌葡萄糖转运
• 2.1.1.4 NO与骨骼肌收缩
• 2.1.1.5 NO在骨骼肌中的其它功能
• 2.1.2 NO在其他系统中的功能
• 2.1.2.1 NO在心血管系统中的作用
• 2.1.2.2 NO在神经系统中的作用
• 2.1.2.3 NO的细胞毒性作用
• 2.2 一氧化氮合酶
• 2.2.1 一氧化氮合酶的分型及定位
• 2.2.2 NOS的激活及一氧化氮的生成
• 2.2.3 NOS的调节
• 2.3 运动与NO/NOS
• 2.4 低氧对骨骼肌NO/NOS的影响
• 3 研究材料与方法
• 3.1 实验动物
• 3.2 实验设计与方法
• 3.2.1 单纯低氧暴露实验
• 3.2.2 一次低氧运动后不同恢复环境实验
• 3.2.3 大鼠腓肠肌样本的采集与处理
• 3.3 测试指标与具体测试方法
• 3.3.1 指标测试方法及原理
• 3.3.2 测试用主要试剂及试剂盒
• 3.3.3 Western blot主要试剂配制
• 3.3.4 主要实验仪器
• 3.3.5 抗体及预染蛋白分子量标准
• 3.3.6 蛋白浓度及NO浓度和NOS活性指标的测试
• 3.4 Western Blot测试右侧腓肠nNOS蛋白含量
• 3.4.1 右侧腓肠肌匀浆的具体步骤
• 3.4.2 蛋白浓度调整
• 3.4.3 Western blot测定右侧腓肠肌nNOS含量的具体步骤
• 3.4.4 图像分析
• 3.5 实时荧光定量RT-PCR测定nNOSmRNA的表达
• 3.5.1 试剂盒提取RNA（QIAGEN kit）
• 3.5.2 测定RNA的浓度及OD值（纯度）
• 3.5.3 用9%变性琼脂糖凝胶电泳确定RNA的完整性
• 3.5.4 先采用普通PCR检验扩增效果
• 3.5.5 引物设计
• 3.5.6 mRNA反转录成cDNA（模板）
• 3.5.7 溶解引物
• 3.5.8 实时荧光定量RT-PCR过程
• 3.5.8.1 实时荧光定量RT-PCR反应体系
• 3.5.8.2 实时荧光定量PCR程序（反应条件）
• 3.5.9 软件读数
• 3.5.10 实时荧光定量RT-PCR产物定量校正与分析
• 3.6 数据统计方法
• 4 实验结果
• 4.1 单纯低氧暴露实验
• 4.1.1 大鼠体重的变化
• 4.1.2 单纯低氧暴露大鼠腓肠肌NO浓度和TNOS活性的变化
• 4.1.3 Western blotting测定nNOS蛋白含量结果
• 4.1.3.1 电泳条带图（DYCZ-24D）
• 4.1.3.2 nNOS蛋白含量结果
• 4.1.4 实时荧光定量RT-PCR结果
• 4.1.4.1 实时荧光定量RT-PCR18S和nNOS扩增溶解曲线
• 4.1.4.2 实时荧光定量RT-PCR测定nNOS基因表达结果
• 4.2 急性低氧运动后不同恢复环境实验
• 4.2.1 急性低氧运动大鼠体重变化
• 4.2.2 一次性低氧间歇运动后不同恢复条件下大鼠膝肠肌NO浓度和 TNOS活性的变化
• 4.2.3 Western blotting测定nNOS蛋白表达结果
• 4.2.4 实时荧光定量RT-PCR结果
• 5 分析讨论
• 5.1 体重变化
• 5.2 单纯低氧暴露对NO浓度、NOS活性及nNOS蛋白和基因表达的影响
• 5.3 一次低氧运动和不同恢复环境对NO浓度、NOS活性及nNOS蛋白和基因表达的影响
• 5.3.1 一次低氧运动对NO/NOS系统的影响
• 5.3.2 低氧运动后不同恢复环境对NO/NOS系统的影响及与运动训练的关系
• 6 结论
• 致谢
• 参考文献
• 个人简历 在读期间发表的学术论文与研究成果