三种蔬菜病害病原体的分子特征分析和分子检测研究

论文摘要

番茄和黄瓜是我国广泛栽培的蔬菜种类,若受到病害的侵染,则严重影响其产量和质量。其中番茄灰霉病、黄瓜霜霉病及黄瓜白粉病是栽培地较为常见的病害,发生普遍且危害严重,其病原体均为真菌,在发病初期以常规方法难以诊断,常由于诊断的不及时而造成严重后果。 番茄灰霉病的病原菌是灰葡萄孢（Botrytis cinerea）,黄瓜霜霉病的病原菌为古巴假霜霉病菌（Pseudoperonospora cubensis）。黄瓜白粉病的病原菌据《中国真菌志,白粉菌目》记载存在两种,分别为瓜类单囊壳（Sphaerotheca cucurbitae）和葫芦科白粉菌（Erysiphe cucurbitacearum）,但上海地区致病的病原菌据上海交通大学农业与生物学院植物病理研究室形态鉴定为Sphaerotheca fuliginea。 本项课题从病原菌入手,分析、筛选番茄灰霉病、黄瓜霜霉病及黄瓜白粉病3种病原菌种特异的分子特征,并建立和评价了分子检测的方法,通过研究取得的主要结果如下: 1.扩增和测定了灰葡萄孢4个地理株的rDNA-ITS,其序列长度为424bp,GC含量分别为44.81%（hm1）,45.28%（hm2/hm3）和45.05%（hm4）。各部分的界限参照文献确定:位点1-120为部分ITS1,121-267为完整的5.8S,268-424为部分ITS2。4个地理株间的序列除ITS1区存在3个位点改变外,其他区域无差异。灰葡萄孢的rDNA-ITS序列与其10个近缘种进行比对,结果显示:灰葡萄孢与蚕豆葡萄孢、Botrytis tulipae和Sclerotinia tetraspora相比,差异较小,hm4和蚕豆葡萄孢、Botrytis tulipae比较分别有1个碱基差异,均分布在ITS1,ITS2则完全相同;与Sclerotinia tetraspora相比则有8个位点差异:与其余7个近缘种的差异较大,序列差异范围分别为0.025-0.116（ITS1）和0.013-0.109（ITS2）。 2.扩增和测定了灰葡萄孢4个地理株的P729片断,长度为618bp,GC含量分别为47.25%（hm1/hm3/hm4）和46.76%（hm2）。比较各地理株间以及文献报道的序列（AJ422103）差异,显示hm1、hm3与文献报道序列AJ422103完全相同,hm2、hm4与之存在差异,分别位于位点180/454/475（hm2）,156/180/518（hm4）。 3.扩增和测定了灰葡萄孢4个地理株的28S-D3,所获序列长度为243bp,灰葡萄孢4个地理株的序列完全相同,与Botrytis tulipae的也完全相同;而与Sclerotinia tetraspora、Botrytis porri仅有1个碱基差别,与Sclerotinia minor、

论文目录

• 文献综述
• 1 番茄灰霉病及其病原
• 2 黄瓜霜霉病及其病原
• 3 黄瓜白粉病及其病原
• 4 植物病害诊断方法
• 第一部分 番茄灰霉病菌的分子特征研究
• 1 材料和方法
• 1.1 病菌及来源
• 1.2 主要仪器和试剂
• 1.3 基因组DNA的提取
• 1.4 PCR扩增
• 2 结果
• 2.1 PCR扩增结果
• 2.2 ITS序列分析
• 2.3 P729序列分析
• 2.4 28S-D3序列分析
• 3 讨论
• 第二部分 黄瓜霜霉病菌和黄瓜白粉病菌的分子特征研究
• 1 材料和方法
• 1.1 病菌及来源
• 1.2 主要仪器和试剂
• 1.3 基因组 DNA提取
• 1.4 黄瓜霜霉病菌的分子特征扩增
• 1.5 黄瓜白粉病菌rDNA-ITS扩增
• 1.6 序列的测定和分析
• 2 结果
• 2.1 黄瓜霜霉病菌
• 2.1.1 28S-D3区扩增和序列分析
• 2.1.2 ITS区扩增和序列分析
• 2.2 黄瓜白粉病菌
• 2.2.1 ITS区扩增和序列特征
• 2.2.2 生物信息学分析
• 3 讨论
• 第三部分 番茄灰霉病的 PCR分子诊断
• 1 材料和方法
• 1.1 病菌及来源
• 1.2 主要仪器和试剂
• 1.3 基因组DNA抽提方法的优化
• 1.3.1 抽提基因组 DNA的方法
• 1.3.2 基因组 DNA抽提方法的评价
• 1.4 分子诊断方法的特异性、灵敏性测试
• 1.4.1 引物p729+/p729-特异性试验
• 1.4.2 灵敏性试验
• 2 结果与讨论
• 2.1 不同抽提方法所获基因组 DNA为模板进行 PCR扩增的结果比较
• 2.2 分子诊断的特异性检测
• 2.3 分子诊断的灵敏性检测
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果