大黄素对非酒精性脂肪肝大鼠的干预作用及可能机制研究

论文摘要

目的利用高脂饮食复制非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠模型,观察大黄素对NAFLD模型大鼠的干预作用,并探讨大黄素对NASH大鼠肝脏TNFa、IL-1β表达的可能影响,以及对NASH大鼠肝脏LPS-TLR4-NF-KB信号转导通路的可能作用。初步探讨大黄素防治NAFLD的作用及可能的药理作用机制,为临床应用大黄素治疗NAFLD提供实验依据。方法42只雄性SD大鼠适应性饲养一周后,按体重编号,完全随机分为正常组8只和高脂造模组34只。正常组予普通饲料喂养,高脂造模组予高脂饲料喂养,均自由饮水。实验第4周末从高脂造模组随机抽取2只大鼠,处死后取其肝脏行肝组织病理学检查,以诊断有明显脂肪肝改变。造模成功后,正常组（A组）8只大鼠继续予普通饲料喂养,同时予生理盐水10mL/kg/qd灌胃；剩余的造模组32只大鼠随机分为模型组（B组）8只、大黄素低量组（C组）8只、大黄素高量组（D组）8只和二甲双胍组（阳性对照组）（E组）8只,均继续予高脂饲料喂养。模型组在予高脂饲料的同时予生理盐水10mL/kg/d灌胃（ig）,大黄素低、高剂量组在予高脂饮食的同时分别予大黄素20mg/kg/d和40mg/kg/d[即大黄素混悬液（2或4g/L）10 mL/kg/d],ig,阳性对照组在予高脂饲料的同时予以二甲双胍150mg/kg/d, ig,均灌胃8周。于实验第12周末处死大鼠前1d,大鼠剪尾取血,测定血糖水平。实验第12周末,处死大鼠,门静脉取血和下腔静脉取血,取肝右叶组织数块,称大鼠体重和肝脏重量,计算肝指数,观察大鼠肝脏大体形态,光镜下HE染色观察肝脏组织病理,计算肝脏脂肪变程度分级和肝脏炎症分级。全自动生化仪检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、血清胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平,并计算OGTT。免疫组化检测肝组织TNFa, NF-κB的表达。RT—PCR法检测各组大鼠肝脏组织IL-1βmRNA、TLR4 mRNA的表达。鲎试剂法检测门静脉血浆内毒素水平。Western-blotting法检测肝脏组织TLR4的表达。酶联免疫吸附测定（ELISA）双抗体夹心法测定肝脏组织IL-1β水平。结果本实验以高脂饲料喂养4周成功复制了大鼠单纯性脂肪肝（NAFL）,12周成功复制了大鼠非酒精性脂肪性肝炎（NASH）模型。12周末时B组大鼠体重明显高于A组,（P<0.05）, C、D组与B组相比差异无统计学意义（p>0.05）。B组大鼠肝指数明显高于A组（p<0.01）,C、D、E组肝指数较模型组均明显降低（p<0.01）。B组大鼠血TC、TG显著高于A组（p<0.01）,C、D组血TC、TG较B组均明显降低（p<0.01）,D组血TC、TG比较C组血TC、TG降低,差异有统计学意义（p<0.01）。与B组比较,C、D组大鼠肝脏脂肪变差别不明显（P>0.05）。与B组比较,C、D组肝脏炎症程度显著降低,（p<0.05,p<0.01）,且D组肝脏炎症程度比较C组降低,差别有统计学意义（p<0.01）。与B组比较,C、D大鼠血清ALT、AST水平降低,有统计学差异（p<0.01）,且D组大鼠血清ALT、AST水平较C组显著降低（p<0.01）。免疫组化检测显示,B组TNFa的表达较A组增强（P<0.01）,与B组相比,D组大鼠TNFa表达明显减弱（p<0.05）；B组肝脏NF-KB的表达较A组增强（P<0.01）,D组肝脏NF-KB的表达较B组显著降低（P<0.01）。TNFa与血清转氨酶之间,有良好的相关性。RT-PCR检测结果显示,与B组相比,D组大鼠肝脏IL-pmRNA显著下调P<0.05),C组与B组相比无显著差异（P>0.05）,与B组比较,D组显著下调肝脏组织TLR4mRNA的表达（P<0.05）。ELISA法测定显示与B组比较,C、D组大鼠肝脏IL—1β的表达显著降低（P<0.01）。鲎试剂法检测内毒素水平,B组大鼠门静脉内毒素水平比较A组显著升高（P<0.01）,D组大鼠门静脉内毒素水平比较B组有显著降低（P<0.01）,C组大鼠门静脉内毒素水平比较B组有降低,但差别无显著性（P>0.05）。Western-blotting法检测肝脏TLR4蛋白表达结果显示,与B组比较,D组大鼠肝脏TLR4蛋白表达显著下调（P<0.05）。结论1.大黄素可有效干预非酒精性脂肪性肝病大鼠模型的形成。2大黄素有减低非酒精性脂肪性肝病大鼠血清TG、TC作用。3.大黄素可明显减轻非酒精性脂肪性肝病中的炎症反应。4抑制肝脏TNF-α、IL-1β的表达可能是大黄素发挥NASH抗炎作用的机制之一5.大黄素具有减少NASH大鼠内毒素产生的作用。6.大黄素可能通过下调损伤信号分子TLR4、NF-KB的表达抑制NASH炎性因子的产生。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 中英文缩写表
• 前言
• 第一章 大黄素干预大鼠非酒精性脂肪肝的实验研究
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 结果
• 讨论
• 第二章 大黄素对非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏炎性因子的影响
• 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 第三章 大黄素对NASH大鼠肝脏TLR4、NF-κB表达的影响
• 材料与方法
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 实验结果
• 3.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 读博士学位期间论文发表集情况