论文摘要
目的1、观察原花青素（proanthocyanidins,PC）对氨基脲（semicarbazide,SEM）致小鼠免疫损伤的干预效果,并比较免疫损伤前、后添加原花青素的干预效果;2、探讨原花青素对氨基脲致小鼠免疫损伤保护作用的可能机制,为原花青素的进一步开发利用提供理论依据。方法80只清洁级成年昆明种（KM）小鼠,雌雄各半,按体重随机分为8组,每组10只:溶剂对照组,SEM染毒组,SEM染毒后加低、中、高剂量PC保护组,低、中、高剂量PC保护后加SEM染毒组。溶剂对照组用去离子水灌胃;SEM染毒组按56.25 mg/kg·bw SEM溶液灌胃染毒2周,再继续用去离子水灌胃4周;SEM染毒后加低、中、高剂量PC保护组,先给3组动物均按56.25 mg/kg·bw SEM溶液灌胃染毒2周后,再分别按设计PC的保护剂量（100、200、400mg/kg·bw）继续灌胃4周;低、中、高剂量PC保护后加SEM染毒组,先分别给3组动物按设计PC的保护剂量（100、200、400mg/kg·bw）灌胃4周,再继续分别按56.25 mg/kg·bw SEM溶液灌胃染毒2周。以上各组动物灌胃溶液均用去离子水作溶剂,按10ml/kg·bw体积灌胃,连续灌胃6周,每日1次。末次灌胃24h后,摘眼球采血,制备血清用试剂盒检测血清中SOD活力和MDA含量;颈椎脱臼处死小鼠,中性红法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能;无菌取脾制备脾细胞悬液,改良MTT法检测NK细胞杀伤活性;溶血空斑法检测抗体形成细胞数;MTT法测定T细胞增殖能力。剪下小鼠左右耳壳并分别取直径8mm耳片并称重,计算肿胀度测定小鼠迟发型变态反应（DTH）;分离各组小鼠胸腺、脾脏,称重并计算脏器系数;常规病理学切片,HE染色观察脾脏组织形态学变化。结果1、SEM染毒组小鼠体重增长低于溶剂对照组（P<0.05）;低、中、高剂量PC先保护组小鼠体重增长分别高于PC后保护组,高剂量PC组间差别有统计学意义（P<0.05）。2、SEM染毒组小鼠脾脏、胸腺脏器系数与溶剂对照组比较降低（P<0.05）;中、高剂量PC后保护组小鼠脾脏脏器系数高于SEM染毒组（P<0.05）;低、中、高剂量PC先保护组小鼠胸腺脏器系数分别高于同剂量PC后保护组,差别有统计学意义（P<0.05）,并呈剂量-效应关系。3、脾脏病理组织学观察显示:溶剂对照组脾脏组织被膜完整光润,脾小体结构完整,红、白髓分界清楚,数目正常,红髓的脾索、脾窦排列正常,白髓的生发中心清楚,动脉周围淋巴细胞正常;SEM染毒组脾小体结构破坏,红、白髓分界不清,数目减少,脾索、脾窦排列紊乱,生发中心和边缘区模糊,动脉周围淋巴细胞减少;PC后保护组脾脏的形态较SEM染毒组有所改善,且随PC剂量的加大改善愈明显,脾小体机构趋完整,红白髓分界趋清楚,数目增多,生发中心趋明显,动脉周围淋巴细胞数目渐趋增加;PC先保护组脾脏的脾小体结构、生发中心和动脉周围淋巴细胞数量改善较PC后保护组效果更明显。4、与溶剂对照组相比,SEM染毒组小鼠NK细胞活性降低（P<0.05）;与SEM染毒组比较,中、高剂量PC后保护组小鼠NK细胞活性有所提高,差别有统计学意义（P<0.05）;中、高剂量PC先保护组小鼠NK细胞活性与同剂量PC后保护组比较均有所升高（P<0.05）,并呈剂量-效应关系。5、SEM染毒组小鼠腹腔巨噬细胞对中性红的吞噬能力与溶剂对照组比较有所降低（P<0.05）;中、高剂量PC后保护组小鼠腹腔巨噬细胞对中性红的吞噬能力与SEM染毒组相比有所提高,差别有统计学意义（P<0.05）;与同剂量PC组相比,PC先保护组和PC后保护组小鼠腹腔巨噬细胞对中性红的吞噬能力无显著差别（P>0.05）。6、SEM染毒组与溶剂对照组比较可降低小鼠抗体形成细胞数（P<0.05）;中、高剂量PC后保护组与SEM染毒组相比小鼠抗体形成细胞数升高（P<0.05）;中、高剂量PC先保护组与同剂量PC后保护组比较可提高小鼠抗体形成细胞数（P<0.05）。7、与溶剂对照组相比, SEM染毒组可降低小鼠淋巴细胞增殖力（P<0.05）;中、高剂量PC后保护组与SEM染毒组相比,小鼠淋巴细胞增殖力有所提高,差别有统计学意义（P<0.05）;中、高剂量PC先保护组小鼠淋巴细胞增殖力比同剂量PC后保护组均明显提高（P<0.05）。8、SEM染毒组与溶剂对照组比较可降低小鼠左右耳片肿胀度（P<0.05）;PC后保护组与SEM染毒组相比小鼠左右耳片肿胀度升高（P<0.05）;PC先保护组小鼠左右耳片肿胀度和同剂量PC后保护组相比均有所提高,差异有统计学意义（P<0.05）。9、与溶剂对照组相比,SEM染毒组小鼠血清SOD活性代偿性升高,MDA含量升高（P<0.05）;中、高剂量PC后保护组与SEM染毒组相比,小鼠血清SOD活性升高（P<0.05）,MDA含量有所降低（P<0.05）;中、高剂量PC先保护组小鼠血清SOD活性与同剂量PC后保护组相比均有所升高（P<0.05）,MDA含量均明显降低（P<0.05）,并均呈剂量-效应关系。结论1、一定剂量（200-400mg/kg·bw）原花青素（PC）可保护或减轻氨基脲（SEM）引起的小鼠免疫损伤作用;2、免疫损伤作用前添加PC比损伤后添加PC效果更明显;3、PC对SEM致小鼠免疫损伤的保护机制可能为抗氧化损伤。