产喜树碱内生真菌的分离和培养研究

论文摘要

植物次生代谢产物具有多种重要的生物学功能,在工农业生产和人们日常生活中具有广阔的应用情景。生物碱组成了植物最大的一类天然次生代谢产物,提供了许多具有药用活性的化合物。喜树碱和喜树碱衍生物属于单萜类吲哚生物碱,具有显著的抗癌生物活性。喜树碱是喜树中含有的一种生物碱,在植物防御反应中起着一定的作用。从近年来的研究看,植物体中存在内生真菌是普遍的。内生真菌可产生一些重要的抗人类疾病的药物。因此,开展喜树内生真菌的分离及其代谢产物的研究,将无疑为人类从微生物角度寻找抗癌药物开辟一条新的途径。本实验从喜树（Camptotheca acuminata）中分离出32株内生真菌,其发酵物经TLC、HPLC分析,结果表明有1株内生真菌能产喜树碱;该菌株经形态学特征鉴定为束丝菌（Ozonium sp.）,并被命名为CA1。在对此喜树内生真菌适生碳源、氮源和生长情况研究的基础上,通过L9（34）正交实验筛选了其发酵培养基。结果表明,果糖1%、蔗糖1%、蛋白胨0.2%、酵母粉0.5%、KH2PO40.5%、MgSO4.7H2O 0.3%、VB1 0.001%为最优发酵培养基。该研究为探索内生真菌生产喜树碱奠定了基础。由于内生真菌与宿主之间可能存在一种在两种生物体内遗传交换的分子机制,根据喜树产喜树碱代谢途径中的关键酶3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A还原酶（3-hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzyme A reductase,HMGR）编码序列设计引物,对内生真菌CA1用PCR的方法进行分子鉴定。该菌株的基因组DNA在PCR后的电泳检测中有特异的扩增条带。经测序和序列比对后证实其为HMGR编码序列的核心片断,从而在分了学水平证明了该内生真菌产喜树碱的可能性。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩写词表
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1.喜树和喜树碱
• 2.喜树碱的分布
• 3.喜树碱抗癌作用机制
• 4.喜树碱的生物合成途径
• 5.喜树碱的生产及发展
• 6.喜树内生真菌
• 第二章 喜树内生真菌的分离及鉴定
• 1.材料与方法
• 2.结果
• 3.讨论
• 第三章 喜树内生真菌发酵培养基的优化
• 1.材料与试剂
• 2.结果
• 3.讨论
• 第四章 喜树内生真菌HMGR基因核心片段的克隆
• 1.材料与方法
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 小结
• 参考文献
• 硕士期间发表文章
• 致谢