论文摘要
目的（1）探讨广西地区甲状腺乳头状癌（PTC）BRAF基因第15外显子T1799A的突变与临床病理学参数之间的关系,揭示BRAF癌基因突变型PTC组织侵袭性、颈部淋巴结转移及对术后局部复发的影响。（2）探讨BRAF基因突变型和野生型PTC组织中细胞周期调控蛋白CyclinD1、P27蛋白及Na+/I-同向转运体（NIS）、甲状腺过氧化物酶（TPO）蛋白的表达,分析BRAF基因突变与四种蛋白表达的相关性,揭示BRAF基因突变对PTC临床病理特征影响的内在原因和机制。方法收集广西医科大学第一附属医院病理科2004年1月～2010年3月间经手术切除的115例PTC和30例甲状腺良性病变（结节性甲状腺肿20例、甲状腺腺瘤10例）石蜡包埋组织块,DNA提取试剂盒提取石蜡组织切片中的DNA,PCR扩增BRAF基因第15外显子,单链构象多态性分析（single strand conformation polymorphism, SSCP）找出异常条带,对异常条带的PCR扩增产物行DNA序列双向测序分析。免疫组织化学方法（SP法）检测石蜡切片中CyclinD1、P27、NIS和TPO蛋白的半定量表达。比较PTC与甲状腺良性病变组织BRAF基因突变率及CyclinD1、P27、NIS和TPO蛋白表达的差异。所得数据结果应用SPSS13.0统计软件包进行分析,检验水准以P<0.05为差异有统计学意义。结果1. PTC组织中BRAF基因突变率为48.7%（56/115）。DNA正反双向测序结果证实为错义突变,即第15外显子的单个碱基错义突变（T-1799-A）。性别、肿瘤大小（<2cm或≥2cm）对PTC组织BRAF突变率的影响无显著性意义（χ2=0.352,P>0.05;χ2=0.235,P>0.05）;年龄组（<45岁与≥45岁）突变率的差异有统计学意义（χ2=6.317,P<0.05）;PTC组织亚型（经典型、滤泡亚型、高柱状细胞型）及Ⅰ/Ⅱ期与Ⅲ/Ⅳ期PTC的BRAF突变率的差异有统计学意义（χ2=20.325,P<0.05;χ2=8.681,P<0.05）;肿瘤超过腺体包膜、有无颈部淋巴结转移均对突变率有显著性影响（χ2=20.892,P<0.05;χ2=13.349,P<0.05）。2.（1）PTC组织CyclinD1蛋白的阳性表达率为65.2%（75/115）,BRAF MT和WT基因组PTC的阳性表达率分别为80.3%（45/56）和50.8%（30/59）,差异有统计学意义（P<0.001）。（2）PTC组织P27蛋白的阳性表达率为41.7%（48/115）。BRAF MT和WT基因组PTC的阳性表达率分别为25.0%（14/56）和57.6%（34/59）,差异有显著性（P<0.001）。（3）PTC组织NIS蛋白阳性表达率为47.8%（55/115）,BRAF MT和WT基因组PTC的阳性表达率分别为26.8%（15/56）和67.8%（40/59）,差异有显著性（P<0.001）。（4）PTC组织TPO蛋白阳性表达率为47.8%（55/115）,BRAF MT和WT基因组PTC的阳性表达率分别为32.1%（18/56）和62.7%（37/59）,差异有显著性（P<0.001）。（5）Spearman相关性分析,BRAF基因突变与CyclinD1蛋白表达呈正相关（r=0.290, P<0.05）;BRAF基因突变与P27、NIS和TPO蛋白表达呈负相关,其相关系数r分别为-0.352,-0.387和-0.298,P值均小于0.05。结论1.广西PTC患者的BRAFT1799A基因突变率高,BRAF基因突变检测可以作为甲状腺良、恶性病变鉴别的辅助指标。2. BRAFT1799A基因突变在致PTC发生发展过程中影响PTC肿瘤细胞的分子生物学改变,可致CyclinD1蛋白表达上调和P27、NIS及TPO蛋白表达下调,PTC组织侵袭力高,颈部淋巴结转移力强。3.联合检测BRAF基因突变及CyclinD1、P27、NIS及TPO蛋白表达情况,有助于对PTC临床情况的判断,为PTC治疗方案的合理制定、评估转移和预后提供理论依据。