哮喘儿童CRHR1基因多态性与ICS疗效的相关性研究

论文摘要

研究背景:2006年GINA将糖皮质激素（ICS）和白三烯调节剂（LTM）列为儿童轻度持续性哮喘的一线长期控制药物,同时也强调,ICS是目前最有效的哮喘长期控制药物,其总体疗效优于LTM。但临床发现哮喘儿童对两种控制药物的治疗反应具有明显的个体差异,大部分患儿对ICS治疗反应优于LTM,而确有部分患儿LTM治疗反应优于ICS。目前国内外尚无可较准确预测哮喘个体对ICS或LTM疗效反应的相关指标,临床选择哮喘儿童的初始治疗药物存在较大的随机性。ICS作为首选的儿童哮喘长期控制药物,总体而言,能有效控制哮喘症状,改善肺通气功能,降低气道高反应性,提高患者的生活质量。但临床观察研究发现,哮喘患者吸入ICS的疗效具有明显的个体差异,部分患者尽管规范使用ICS,甚至高剂量ICS,其病情仍迁延反复,肺功能渐进性下降。目前认为,哮喘患者吸入ICS治疗反应的差异约60%～80%可归之于基因因素,但目前关于决定哮喘患者吸入ICS疗效的相关基因学研究不多,对起作用相关基因的种类、相关位点的数量及其多态性表型尚缺乏全面具体的了解;预测哮喘患者吸入ICS疗效的药物基因学指标的确立将具有重要临床意义,可有助于制定哮喘患者的最佳化个体治疗方案,提高儿童哮喘的总体疗效,减少或避免糖皮质激素潜在的全身性副作用,减轻哮喘患者的经济负担。目前国外有少数研究提示CRHR1基因多态性与哮喘患者吸入ICS疗效相关。但基于目前国外相关研究不多,且不同研究间结果不一致,国内尚未见相关的研究报道,故有必要对我国哮喘儿童CHRH1基因多态性及其与吸入ICS疗效的相关性进行探讨研究,期望能进一步明确可预测哮喘儿童吸入ICS疗效的CRHR1基因型,为我国哮喘儿童选择最佳的个体化哮喘长期控制药物提供药物基因学参考依据。目的:探讨哮喘儿童CRHR1基因rs242941位点多态性及其与ICS疗效的相关性,并同时观察比较CRHR1基因不同表型哮喘患儿临床症状、肺通气功能及气道炎症指标（PD20-FEV1和外周血嗜酸性粒细胞计数）,以了解CRHR1基因多态性与哮喘临床表型的相关性。材料与方法:纳入自2009年10月至2010年12月于本院就诊的5～14岁哮喘儿童156例（哮喘组）,并选择同期在本院进行健康体检的5～14岁健康儿童178例作为对照组。所有入选对象均抽提外周血提取基因组DNA,采用直接测序法检测CRHR1基因rs242941位点的单核苷酸多态性。上游引物:5’ ACCCAGTGCTGTTTCCTGAG 3’ ,下游引物:5’ TTGAGGCCCAGTGACACTTC 3’。哮喘组患儿同时进行过敏原点刺试验及外周血EOS计数检测。哮喘组患儿采用都保干粉吸入装置吸入布地奈德（BUD） 200μg,每天2次。治疗观察期为12周,治疗前及治疗12周后分别进行哮喘症状评分、肺通气功能测定和组胺支气管激发试验。所有实验数据采用SPSS 13.0统计软件做统计学分析。计量资料以均值±标准差（?x±s）表示。基因型和等位基因频率采用直接计数法。各组间基因型、等位基因频率、FEV1改善率≥5%和≥10%患儿所占百分比的比较采用χ2检验。由于PD20-FEV1的数据呈对数正态分布,因此,进行统计学处理前将PD20-FEV1转换为Log PD20-FEV1（ PD20-FEV1:μmol）。两组间比较采用t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果:一、哮喘组和健康组儿童CRHR1基因rs242941位点基因型和等位基因频率比较:我国汉族儿童存在CRHR1基因rs242941位点多态现象,表现型包括GG基因型、GT基因型和TT基因型。哮喘组GG基因型和哮喘组GT/TT基因型（GT基因型+GT基因型）分布频率分别为81.41%（127/156例）和18.59%（29/156例）;对照组GG型和对照组GT/TT基因型分布频率分别为79.78%（142/178例）和20.22%（36/178例）,两组间比较无统计学意义差异（χ2=0.142,P=0.707）。哮喘组等位基因G和T分布频率分别为0.901、0.099;对照组等位基因G和T分布频率分别为0.890、0.109,两组间比较无统计学意义差异（χ2=0.184,P=0.668）。二、哮喘儿童CRHR1基因多态性与哮喘临床表型的相关性:GG基因型哮喘患儿（哮喘GG组）和GT/TT基因型哮喘患儿（哮喘GT/TT组）性别、年龄比较无统计学意义差异（P均>0.05）。哮喘GT/TT组治疗前PD20-FEV1基础值为（1.42±1.28）μmol,明显低于哮喘GG组[（2.20±1.99）μmol ]（t=-2.02,P=0.045）,即哮喘GT/TT组气道高反应性程度明显高于哮喘GG组。哮喘GT/TT组外周血EOS百分比为（7.16±5.09）%,明显高于哮喘GG组[（5.51±3.70）% ]（t=2.01,P=0.046）。哮喘GT/TT组和哮喘GG组治疗前日间/夜间症状评分、FEV1、FEV1/Pred%、皮肤过敏原阳性个数和过敏指数比较均无统计学意义差异（P均>0.05）。三、哮喘儿童CRHR1基因多态性与ICS疗效的相关性:1.哮喘儿童CRHR1基因多态性与ICS改善症状评分的相关性:哮喘GG组和哮喘GT/TT组治疗后日间症状评分和夜间症状评分均较治疗前明显改善（P均<0.05）,哮喘GT/TT组日间症状评分平均改善（0.75±0.12）分,显著优于哮喘GG组[（0.66±0.17）分]（t=2.827,P=0.005）,但两组夜间症状评分平均改善程度无统计学意义差异（t=0.490,P=0.625）。2.哮喘儿童CRHR1基因多态性与ICS改善肺功能效应的相关性:哮喘GG组和哮喘GT/TT组治疗后FEV1和FEV1/Pred%均较治疗前明显改善（P均<0.05）。哮喘GT/TT组FEV1改善率为（14.89±6.82）%,显著高于哮喘GG基因型组[（4.65±13.52）% ]（t=5.872,P=0.007）。两组患儿吸入ICS治疗后FEV1改善率均呈现出明显的个体差异,哮喘GT/TT组FEV1改善率≥5%和≥10%患儿比例分别为89.65%和62.07%,均明显高于哮喘GG组（分别为48.03%和26.77%）（χ2值分别为16.582和13.236,P值均<0.001）。3.哮喘儿童CRHR1基因多态性与ICS改善气道高反应性效应的相关性:哮喘GG组和哮喘GT/TT组治疗后PD20-FEV1均较治疗前明显升高,即气道高反应性明显改善（P均<0.05）。哮喘GT/TT组治疗后PD20-FEV1较治疗前升高（0.96±1.04）μmol,升高程度显著高于哮喘GG组[（0.41±1.36）μmol]（ t=2.071,P=0.040）,即哮喘GT/TT组气道高反应性改善程度明显优于哮喘GG组。结论:1.我国汉族儿童存在CRHR1基因rs242941位点多态现象,表现型包括GG基因型、GT基因型、TT基因型。2.哮喘儿童CRHR1基因rs242941位点的多态性与临床表型及ICS疗效相关。3. GT/TT基因型哮喘患儿外周血EOS百分比和气道高反应性显著高于野生型GG基因型患儿。4. GT/TT基因型哮喘患儿吸入ICS治疗后肺通气功能及气道高反应性的改善程度和日间症状评分控制水平优于GG基因型患儿。5. CRHR1基因rs242941位点变异可增强哮喘患者吸入ICS疗效的机制目前尚不明确,可能机制是CRHR1基因变异导致功能下调,通过减少ACTH分泌抑制了机体受炎症刺激而增加皮质醇分泌的潜能,使哮喘患者气道炎症增加,同时为外源性皮质激素治疗效应的增加提供了可能性。6. CRHR1基因多态性与哮喘儿童ICS疗效相关性的确立,期望能为我国哮喘儿童选择最佳的个体化长期控制药物提供药物基因学参考依据。

论文目录

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