芥子气损伤体内诊断生物标志物检测技术的研究 ——芥子气—DNA加合物

论文摘要

芥子气是一种糜烂性毒剂,首次使用于第一次世界大战,在两伊战争中也曾被使用。据估计一战中芥子气的伤亡率约占化学损伤伤亡率的80%,因此被称为“毒剂之王”。由于其生产容易,易于储备,时至今日,芥子气的现实威胁依然存存。 芥子气的中毒机理十分复杂。它是一种双功能烃化剂,在体内迅速与亲核基团核酸、蛋白质及谷胱甘肽等发生反应。芥子气的毒性作用机理目前还未完全阐明,但DNA的烃化反应被认为是主要的作用。 芥子气损伤体内诊断生物标志物检测技术的研究一直是人们关注的课题,由于芥子气的毒性通常认为是其对DNA的烃化作用引起,因此芥子气—DNA加合物可以作为芥子气损伤的生物标志物。本课题旨在通过现代仪器分析技术建立体内芥子气—DNA加合物的检测方法,以便为芥子气损伤及中毒救治提供可靠依据,为防护医学的研究提供有力工具。 首先我们对HETEG标准品的合成进行了研究,探讨了合成的最佳反应条件,采用柱层析纯化产物。合成的HETEG纯度>98%,产率为17.8%,其紫外光谱、质谱及1H-NMR谱与结构及文献报道一致。 其次建立了中毒DNA样品及全血样品中HETEG的HPLC、LC-MS检测方法。探讨了样品预处理实验条件,通过正交试验确定酸水解最佳条件为磷酸水解,pH3.5,100℃,1hr。而酶水解与酸水解效率相当,因此选用成本低、时间短的酸水解。样品预处理方法满足实验要求,可检测到暴露于0.1mmol/L芥子气浓度的DNA中HETEG及0.5mmol/L芥子气浓度的全血中HETEG。考察了标准曲线线性范围、检测限、精密度等指标。对中毒DNA、全血样品进行了检测,LC-MS更适用于实际中毒样品的检测。 本课题建立了体内芥子气—DNA加合物HETEG的HPLC、LC-MS检测方法,

论文目录

• 缩略语
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 羟乙基硫代乙基鸟嘌呤（HETEG）标准品的制备
• 一、合成路线
• 二、仪器与材料
• 三、实验方法
• 四、结果与讨论
• 第二部分 中毒DNA及全血中HETEG的制备、预处理及检测
• 一、仪器与材料
• 1.1 仪器：
• 1.2 试剂
• 1.3 主要试剂的配制
• 1.4 中毒DNA及血样的制备
• 二、实验方法
• 2.1 液相色谱实验条件
• 2.2 液相色谱-质谱分析条件
• 2.3气相色谱实验条件
• 2.4 样品处理方法
• 三、结果与讨论
• 3.1 HETEG水样测定
• 3.2 DNA样品的预处理及定量分析
• 3.2.1 DNA样品处理流程及优化
• 3.2.2 酸水解正交试验
• 3.2.3 酶水解试验
• 3.2.4 水解条件的确定
• 3.2.5 DNA样品中HETEG的HPLC方法
• 3.2.6 芥子气中毒DNA样品的测定
• 3.2.7 DNA与芥子气反应液中TDG的测定
• 3.2.8 讨论
• 3.3 血液样品的处理及测定
• 3.3.1 HETEG的LC-MS方法
• 3.3.2 血样的处理及测定
• 3.3.3 讨论
• 结语
• 参考文献
• 在学期间发表论文
• 致谢
• 附录
• 芥子气中毒体内诊断生物标志物检测技术的研究进展
• 芥子气-DNA加合物羟乙基硫代乙基鸟嘌呤标准品的制备