别嘌呤醇对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用研究

论文摘要

目的本实验通过制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型,腹腔注射外源性别嘌呤醇（ALLO）,观察ALLO对新生HIBD大鼠脑组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、羟自由基（·OH）及caspase-3基因表达的影响,以探讨ALLO保护脑组织的机制,以期为临床治疗新生儿HIBD提供有效的方法和途径。方法1.制备HIBD模型:将新生7日龄Wistar大鼠行颈部正中切口,分离结扎左侧颈总动脉后给予低氧（8%O2,92%N2）处理2小时,制成HIBD模型。观察缺氧时动物行为变化。2.行为能力检查:分别于手术前及缺氧后1小时对每只新生大鼠进行翻身能力、夹尾左旋测试。3.脑大体形态检查:分别于处死时观察每只新生大鼠脑组织的大体形态。4.SOD、MDA、·OH及caspase-3基因表达测定:56只新生7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组（sham）、生理盐水对照组（NS）和ALLO干预组（ALLO）。假手术组（8只）只予分离但不结扎左侧颈总动脉,于手术恢复后24h处死。其余两组于缺氧结束后1h和24h两次腹腔注射生理盐水或ALLO,并于末次给药后0.5h、24h以及72h处死（每组8只动物）,以患侧脑组织为标本,应用黄嘌呤氧化酶法测定SOD,应用改良的硫代巴比妥酸法测定MDA,应用Fenton反应测定·OH,应用逆转录酶-聚合酶链式反应（RT-PCR）测定caspase-3基因的表达。结果1.行为能力检查术前每只大鼠均做翻身能力、夹尾左旋测定,56只全部正常。sham组测定结果同前。经历缺氧缺血的48只大鼠,26只不能翻身,38只出现夹尾左旋,16只表现不能翻身和夹尾左旋同时存在。2.脑大体检查新生大鼠HIBD后NS对照组结扎侧半球脑组织受损严重,在24h时苍白、水肿明显,体积明显大于对侧,72h可看到结扎侧半球局部出现液化坏死灶;ALLO干预组大鼠未见上述改变或仅见结扎侧脑半球轻微的水肿;sham组大鼠大脑半球左右对称,未见任何病理变化。3.SOD、MDA、·OH表达检测结果与sham组比较,MDA、·OH在HIBD后24h、72h NS对照组的表达明显增高（P＜0.05）,而ALLO干预组水平则较同时间点的NS对照组低（P＜0.05）。总SOD活力在HIBD后24h、72h NS对照组明显降低,与sham组比较有统计学意义（P＜0.05）,而ALLO干预组水平则较同时间点的NS对照组有所回升（P＜0.05）。HIBD后0.5h NS对照组与ALLO干预组及sham组两两比较均无统计学意义（P＞0.05）。4.caspase-3基因表达检测结果与sham组比较,caspase-3基因在HIBD后24h、72h NS对照组表达明显增高（P＜0.05）,而ALLO干预组水平则较同时间点的NS对照组低（P＜0.05）。HIBD后24h、72h NS对照组与假手术组、与同时间点ALLO干预组比较均有统计学意义（P＜0.05）,而HIBD后0.5h NS对照组与ALLO干预组及sham组两两比较均无统计学意义（P＞0.05）。结论1.新生大鼠HIBD模型制作成功。2.新生大鼠HIBD后MDA、·OH表达增高,SOD活力降低,证实存在自由基的损伤;caspase-3 mRNA升高,证实存在细胞凋亡。3.ALLO可能通过抑制MDA、·OH的表达、保护SOD并下调caspase-3基因表达、抑制脑细胞凋亡起到脑保护作用,为ALLO临床治疗新生儿HIBD提供了进一步的理论依据。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
• 1、实验材料
• 2、实验方法
• 3、统计学分析
• 结果
• 1、动物模型行为能力检查
• 2、脑大体形态检查
• 3、SOD、MDA、·OH表达检测结果
• 4、caspase-3基因检测结果
• 讨论
• 1、新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型的建立
• 2、HIBD发病机制中氧自由基的作用
• 3、HIBD发病机制中Caspase-3的作用
• 4、ALLO的药理作用
• 5、ALLO在各系统损伤中的抗氧化作用
• 6、别嘌呤醇与HIBD
• 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述
• 综述正文
• 综述参考文献
• 致谢