论文题目: 钩端螺旋体功能基因组学研究
论文类型: 硕士论文
论文专业: 微生物与生化药学
作者: 殷世亮
导师: 何建勇,赵国屏,任双喜
关键词: 钩端螺旋体,转座,接合转移,肽键去甲基化酶
文献来源: 沈阳药科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 钩端螺旋体中国有毒赖株的全基因组测序已经完成，这只是钩端螺旋体功能基因组研究的第一步。在中国有毒赖株中共有大小两个染色体，共4691184对核苷酸，预知含有4727个功能基因。大量基因的功能需要我们通过实验的方法来推知和证明。将未知功能的基因组核苷酸序列转化为有意义的基因功能信息将是一个具有挑战性的工作。 本实验独立进行了钩端螺旋体无毒赖株和有毒赖株培养条件的研究。同时考察了甘氨酸，Mg2+，DMSO，MTT，温度等对钩体生长的影响，掌握了钩体各种培养条件。用钩端螺旋体无毒赖株作为研究对象摸索了钩体的电转化条件，研究了钩端螺旋体有毒赖株的抗药性，并建立了一套有效的抗性筛选方法，为钩端螺旋体有毒赖株的全基因组突变体库的建立创建了平台。 应用转座子对微生物基因的插入突变是研究微生物全基因组功能的常用方法和有力手段，被广泛应用到模式生物的功能基因组学研究当中。通过单引物PCR可以将插入位点在基因组中定位，通过表型的分析可以探知突变基因在基因组中的生物学功能。本实验通过Tn5体转座系统成功摸索出了钩端螺旋体无毒赖株的突变方法，并将Tn5体转座系统加以修饰应用于钩端螺旋体有毒赖株的突变体库的建立当中去。在今后的工作中继续构建整合有带有钩体启动子的转座酶以及多转座位点的体内转座体系。 本实验同时构建了大肠杆菌ET12567接合转移系统，与钩体有毒赖株共培养，以带有钩体鞭毛蛋白基因flgH和抗性筛选标记的接合载体来摸索钩体单基因的插入失活和基因敲除方法。 本实验对钩体中的必须基因金属酶蛋白基因进行了研究，并以肽键去甲基化酶（PDF）蛋白为目标，应用dock分子对接软件搜索specs化合物数据库，应用体外抗菌实验的方法筛选基于PDF药物靶点的抗菌小分子有机化合物，并申请新的化合物专利十项。
论文目录:
中文摘要
Abstract
第一章 前言
第二章 钩端螺旋体突变体库建立的探索
1.引言
2.实验材料
3.实验方法
3.1 钩体法国无毒赖株的突变摸索
3.2 钩体中国有毒赖株的突变摸索
3.3 钩体转化子的验证
4.实验结果
5.讨论
第三章 对钩端螺旋体单基因插入失活的研究
1.引言
2.实验材料
3.实验方法
3.1 实验流程图
3.2 pSL301质粒的构建
3.3 pSL302质粒的构建
3.4 pSL303质粒的构建
3.5 ET12567菌株与钩体赖株的接合转移
3.6 钩体flgH基因突变体的验证
4.实验结果
5.讨论
第四章 基于钩端螺旋体PDF靶蛋白的抗菌化合物筛选
1.引言
2.实验材料
3.实验方法
3.1 克隆表达PDF酶蛋白
3.2 化合物的体外抗菌实验
4.实验结果
5.讨论
全文结论
参考文献
附录
致谢
发布时间: 2006-11-27
参考文献
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