石榴皮为原料酶法生产鞣花酸

论文摘要

鞣花酸是一种是广泛存在于各种软果、坚果等植物组织中的天然多酚组分,它是没食子酸的二聚衍生物,是一种多酚二内酯,具有抗癌、抗病毒、抗氧化以及美白等作用。近年来鞣花酸越来越得到人们的关注,应用也越来越广泛。本文研究以石榴皮为原料酶法生产鞣花酸的工艺条件。主要研究内容和结果如下：（1）以黑曲霉为出发菌,通过研究碳源,培养时间,表面活性剂吐温-80添加量,石榴皮单宁含量及pH值对产生单宁酶的影响,确定了最佳产酶的发酵培养基。最佳培养基为：乳糖10g/L, NaNO32g/L,KH2PO41g/L, K2HPO41g/L, KCl0.5g/L, MgSO40.5g/L, FeSO40.01g/L,单宁3.3%,吐温-806ml/L, pH4.0,培养6天。（2）通过探讨pH值、底物浓度等因素对产鞣花酸的影响,确定了酶法生产鞣花酸的最佳条件：含单宁6.7%（W/V）溶液50ml中加入65U/ml酶液15ml,调pH5.5,30℃反应48h。（3）对酶法生产的鞣花酸进行了纯化。根据鞣花酸在碱溶液中变性溶解,酸性溶液中复性析出的特征,初步确定了碱溶酸沉法纯化鞣花酸的工艺：将22.3%粗鞣花酸溶于32g/L的NaOH水溶液中,搅拌,离心,弃沉淀,取上清液用1.5%的Hcl调pH值至4.8,离心,将下层沉淀用去离子水洗涤一次,烘干后得黄绿色产品,纯度为61.3%。（4）对黑曲霉产生的单宁酶的酶学性质进行了初步的研究。以没食子酸丙酯为底物,最适pH5.0,温度60℃。该酶在pH5～6范围内较为稳定,在70℃保温30min,可保存70%以上的酶活力。（5）研究了各种离子及添加剂对酶活的影响。Ba2+,OH-,CO32-对单宁酶有激活作用；Ag+, Cu2+, Mn2+, Zn2+, Ca2+,Fe2+对单宁酶的活力抑制较小；Co2+, Al3+, EDTA, DMSO, β-巯基乙醇对酶活有较大的抑制作用；S2O32-, Pb2+而对单宁酶的活力抑制作用最大：铵盐离子和表面活性剂对酶活没有抑制。

论文目录

• 学位论文数据集
• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 鞣花酸概述
• 1.1.1 鞣花酸的理化性质
• 1.1.2 鞣花酸的制备及纯化方法
• 1.1.3 鞣花酸的测定
• 1.1.4 鞣花酸的生理功能
• 1.2 单宁酶的概述
• 1.2.1 单宁酶的简介
• 1.2.2 单宁酶的生产
• 1.2.3 单宁酶的提取与纯化
• 1.2.4 单宁酶的酶活力测定
• 1.2.5 单宁酶的应用
• 1.3 本文研究内容及方案
• 第二章 单宁酶的发酵
• 2.1 实验材料及仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 菌种
• 2.2.2 培养基
• 2.2.3 培养方法
• 2.2.4 石榴皮中单宁测定方法
• 2.2.5 酶活力测定方法
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 单宁浓度对于发酵产酶的影响
• 2.4.2 培养时间对发酵产酶的影响
• 2.4.3 碳源对发酵产酶的影响
• 2.4.4 表面活性剂对发酵产酶的影响
• 2.4.5 pH值对发酵产酶的影响
• 2.5 本章小结
• 第三章 酶法生产鞣花酸
• 3.1 实验材料及仪器
• 3.2 实验原理及检测方法
• 3.2.1 实验原理
• 3.2.2 检测方法
• 3.2.3 实验方法
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 pH值对鞣花酸生产的影响
• 3.3.2 反应时间对鞣花酸生产的影响
• 3.3.3 加酶量对鞣花酸生产的影响
• 3.3.4 酸解鞣花酸和酶解鞣花酸的比较
• 3.4 本章小结
• 第四章 鞣花酸的纯化
• 4.1 实验部分
• 4.1.1 实验材料与仪器
• 4.1.2 实验方法
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 重结晶方法与碱溶酸沉比较
• 4.2.2 碱溶酸沉
• 4.3 本章小结
• 第五章 酶学性质的研究
• 5.1 实验材料与方法
• 5.1.1 实验材料与仪器
• 5.1.2 实验方法
• 5.2 结果与讨论
• 5.2.1 酶的提取方法的对比
• 5.2.2 超声波反复破碎处理菌体
• 5.2.3 酶的生物学特性
• 5.5 本章小结
• 第六章 结论与建议
• 6.1 结论
• 6.2 建议
• 参考文献
• 研究成果及发表的学术文章
• 致谢
• 作者和导师简介
• 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书